復(fù)爾康注射液抗腫瘤活性研究及對(duì)血管生成的影響.pdf

1、目的：復(fù)爾康注射液是從中藥青蒿中提取出有效成分青蒿油,與甘草酸銨和維A酸組合研制成的能供靜脈給藥的多相脂質(zhì)體注射液。前期研究結(jié)果顯示復(fù)爾康注射液能明顯抑制人肝癌HepG2細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)其凋亡,且能不同程度減弱HepG2細(xì)胞VEGF的分泌表達(dá)。本研究檢測(cè)了復(fù)爾康注射液的體外、體內(nèi)抗腫瘤活性,以及體外對(duì)腫瘤血管生成的影響,旨在進(jìn)一步闡明復(fù)爾康注射液的抗腫瘤活性及其分子機(jī)制,為復(fù)爾康注射液的在腫瘤治療中的應(yīng)用提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：(1)

2、體外抗腫瘤活性:以人紅白血病細(xì)胞K562、人肝癌細(xì)胞SMMC-7721、人肝癌細(xì)胞BeL-7402、人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116和人黑色素瘤細(xì)胞KB為細(xì)胞模型,采用CCK-8試劑盒(Cell Counting Kit-8),測(cè)定復(fù)爾康注射液對(duì)人腫瘤細(xì)胞株增殖的抑制作用。(2)體內(nèi)抗腫瘤活性:①建立小鼠肝癌H22細(xì)胞實(shí)體瘤模型(S型)和腹水瘤模型(A型),小鼠尾靜脈注射給藥10天,以腫瘤生長(zhǎng)的抑制率(抑瘤率)和生命延長(zhǎng)率測(cè)試復(fù)爾康注射液對(duì)荷瘤

3、小鼠腫瘤生長(zhǎng)的影響;②建立人肝癌SMMC-7721細(xì)胞裸鼠移植瘤模型,在接種后第15天,去除移植瘤未生長(zhǎng)或移植瘤生長(zhǎng)過(guò)緩、過(guò)速的裸小鼠,選擇體內(nèi)已形成瘤塊且瘤徑約≥50 mm3的裸鼠用于實(shí)驗(yàn)。采用腹腔注射給藥,每周連續(xù)給藥5天后停藥2天,共給藥4周。每周測(cè)量瘤徑和體重3次,通過(guò)比較腫瘤體積、相對(duì)腫瘤體積和相對(duì)腫瘤增殖率的變化檢測(cè)復(fù)爾康注射液對(duì)荷瘤裸鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用。(3)體外對(duì)血管生成的影響:采用CCK-8 assay、Woundi

4、ng healing assay和Tube formation assay等檢測(cè)復(fù)爾康注射液對(duì)人微血管內(nèi)皮細(xì)胞HMEC增殖、遷移和小管形成的影響。結(jié)果：(1)體外抗腫瘤活性:復(fù)爾康注射液能明顯抑制K562、SMMC-7721、BeL-7402細(xì)胞的增殖,隨著濃度的增加,抑制作用增強(qiáng),呈現(xiàn)出良好的量效關(guān)系,其IC50分別為(31.75±1.50)、(61.51±1.58)和(68.39±7.16)μg/mL,活性較強(qiáng),但對(duì)HCT116和K

5、B細(xì)胞的抑制作用較弱。(2)體內(nèi)抗腫瘤活性:①?gòu)?fù)爾康注射液6.25、12.5和25 mg×kg-1劑量組對(duì)小鼠肝癌H22實(shí)體瘤(S型)生長(zhǎng)的抑制百分率(抑瘤率)分別為21.50％、39.10％、49.36％,與陰性對(duì)照組比較,差導(dǎo)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但同樣的劑量復(fù)爾康注射液對(duì)小鼠肝癌H22腹水瘤(A型)無(wú)明顯的抑制作用,不能顯著延長(zhǎng)小鼠的生存時(shí)間;②復(fù)爾康注射液126、252、378 mg·kg-1治療組和陽(yáng)性對(duì)照康康萊特注射

6、液均不同程度抑制裸鼠移植瘤的生長(zhǎng),腹腔注射給藥4周后,TV、RTV和[T/C(％)]明顯下降,低、中、高劑量組[T/C(％)]分別為57.75％、39.9％和44.08％,與陰性對(duì)照組比較, P<0.05。(3)體外對(duì)血管生成的影響:復(fù)爾康注射液明顯抑制人微血管內(nèi)皮細(xì)胞HMEC的增殖, IC50為11.44±3.97 mg·L-1;復(fù)爾康注射液在3.125 mg·L-1時(shí)即分別表現(xiàn)出抑制HMEC細(xì)胞遷移和小管形成的作用,且隨著濃度的增加

7、,抑制作用愈明顯,呈現(xiàn)出較好的劑量依賴關(guān)系。結(jié)論：復(fù)爾康注射液體外對(duì)白血病及肝癌細(xì)胞株作用明顯,但對(duì)其他實(shí)體瘤細(xì)胞作用差,對(duì)腫瘤細(xì)胞具有一定的選擇性。復(fù)爾康注射液體內(nèi)對(duì)小鼠肝癌H22實(shí)體瘤(S型)和人肝癌SMMC-7721細(xì)胞裸鼠移植瘤的腫瘤的生長(zhǎng)具有明顯抑制作用,但同樣的劑量下不能延長(zhǎng)H22腹水瘤(A型)小鼠的生存時(shí)間。復(fù)爾康注射液具有抗新生血管生成的作用,體外能明顯抑制HMEC的增殖、遷移和小管形成,結(jié)合其體內(nèi)抗腫瘤活性強(qiáng),推測(cè)抗血