僵蠶酶法水解工藝研究.pdf

1、僵蠶是蠶蛾科昆蟲家蠶(Bombyxmori)4-5齡幼蟲感染(或人工接種)白僵菌(Beaueriabassiana(Bals)Vuill)而致死的干燥蟲體，為傳統(tǒng)的中藥。僵蠶含灰份6.34﹪、蛋白質(zhì)67．44﹪、水分¨．31﹪、脂肪4.38﹪，據(jù)文獻報道，僵蠶具有抗驚厥作用、抗凝、抗血栓、促纖溶、催眠作用、抗癌作用、降糖、降脂作用等作用。 本文綜述了近年來對僵蠶的成分分析、藥理學(xué)研究、酶法水解在中藥提取中的應(yīng)用的研究進展以及可視

2、化優(yōu)化方法的原理及應(yīng)用，并主要研究了僵蠶的酶解工藝以及酶解以后水解度對分子量及其分布的影響，以期能在以后的藥理學(xué)研究中獲得更好的效果。 本課題主要做了以下三個方面的的工作： (1)首先用微量凱氏定氮法測定實驗所采用的原料僵蠶的蛋白質(zhì)含量，并以水解度為指標(biāo)，采用單因素實驗法考察水解時間、中性蛋白酶加入量、水解溫度、pH值、激活劑CaCl2加入量對水解度的影響，得出各個單因素條件的最佳值。原料僵蠶的蛋白質(zhì)含量測定的結(jié)果為53

3、.25﹪，比文獻報道的稍低。 (2)在單因素實驗的基礎(chǔ)上，采用L25(56)正交實驗設(shè)計得出工藝條件各個最佳值，并對實驗數(shù)據(jù)進行分析得出各個影響的因素的主次順序為：溫度的影響最大，其次是固液比，而后是水解時間、酶加入量和pH值，CaCl：的加入量影響較小。然后用可視化優(yōu)化方法處理實驗數(shù)據(jù)，對實驗工藝條件進行預(yù)測得到最佳工藝條件為：酶加入量5﹪，CaCl2加入量4.5﹪，固液比1：5，洲值為6.2，水解時間7．3h，水解溫度53.

4、5'C。經(jīng)驗證實驗驗證后，證明用可視化優(yōu)化方法處理實驗數(shù)據(jù)預(yù)測所得到的工藝條件可信。 (3)在對水解以后的樣品的分子量及其分布的研究中，采用質(zhì)譜(MS)法進行測量。水解前的原料僵蠶的分子量主要分布在300—1500之間，含量比較大的幾種物質(zhì)的分子量主要在500左右，而且分布的比較集中：水解后的樣品分子量主要分布在H8．1-473.4之間；含量的最大的幾種物質(zhì)的分子量主要為¨8．1、205．1和279．1；以本實驗水解得到多肽為活