中藥榮肝合劑對刀豆蛋白A介導的免疫性肝損傷降酶效應的機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   1.理論研究,探討清利活血健脾法與慢性乙型肝炎(CHB)的關系,為CHB的治療提供立法依據(jù),為榮肝合劑提供組方基礎。
   2.研究思路探討,澄清“保肝降酶”治療過程中的一些概念,明確其內涵,使中醫(yī)藥對CHB的治療更為全面客觀。
   3.實驗研究,探討榮肝合劑對刀豆蛋白A(ConA)介導的急、慢性免疫性肝損傷小鼠的降酶效應及其機制。
   4.臨床病例觀察,研究中藥榮肝合劑對CHB患者生存

2、質量的影響。
   方法:
   1.在回顧和總結的基礎上,分析清利活血健脾法與CHB的關系,并與榮肝合劑相對應,分析其組方依據(jù)。
   2.解析“保肝降酶”的內涵,分析中醫(yī)藥保肝降酶治療CHB中存在的問題,探討其應對措施。
   3.(1)急性肝損傷實驗:HBV轉基因小鼠60只,隨機分為6組(模型組、正常組、榮肝合劑組、茵陳蒿湯組、茵陳組、聯(lián)苯雙酯組),每組10只,采用ConA尾靜脈注射制作急性免疫性肝

3、損傷模型。造模后8h,處死動物取血或組織標本檢測ALT、AST、TBiL;觀察病理組織學變化(HE染色);HBV DNA、HBsAg;肝組織MDA及SOD水平;肝組織內淋巴細胞亞群情況變化(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+);細胞凋亡相關基因(Fas、FasL、Bax、bcl—2);肝組織中TNF—α、INF—γ、IL—4、IL—10等細胞因子的變化。
   (2)慢性肝損傷實驗:HBV轉基因小鼠69只,隨機分為正常組10

4、只(尾靜脈注射PBS0.3ml)和ConA造模組59只,采用CortA6μg/g劑量尾靜脈注射制作慢性免疫性肝損傷模型。各組小鼠每日灌胃給予相應藥物,正常組與模型組給予生理鹽水灌胃,共給藥28天。末次灌胃給藥后24h處死動物,取血或組織標本檢測指標(指標同急性肝損傷實驗)。
   4.采用隨機對照研究。區(qū)組隨機,以榮肝合劑為治療藥物,與西藥口服抗病毒藥核苷(酸)類似物(NUCs)為對照,治療期為6個月,以3個月為一訪視點,考核患

5、者血清ALT、AST、HBV DNA水平變化,結合普適性量表SF—36及慢性肝病問卷(CLDQ)觀察榮肝合劑對于CHB患者生活質量的影響。
   結果:
   1.CHB屬本虛標實之證,濕熱、血瘀為標,脾虛為本?;蛞姼斡簦脛t及腎。
   2.CHB的保肝降酶未真正做到降低酶學指標與肝組織學改善并重,未結合抗病毒、提高免疫力、防止纖維化的治療、少有關注患者生存質量。
   3.(1)急性肝損傷實驗:①AL

6、T、AST、TBiL情況:與正常組比較,模型組小鼠血清ALT、AST、TBiL均顯著升高(P<0.01)。榮肝合劑、聯(lián)苯雙酯均可顯著降低血清ALT、AST(P<0.01),榮肝合劑可降低TBiL(P<0.01)。②病理組織學變化:與模型組比較,榮肝合劑組肝細胞變性、壞死及炎細胞浸潤程度較輕,顯示其對肝組織的病理損傷有較好的改善作用(P<0.05);而聯(lián)苯雙酯組、茵陳組與模型組的病損程度相似。③HBsAg、HBV DNA變化:榮肝合劑組H

7、BVDNA與茵陳組比較有顯著性差異(P<0.05),其余指標各組比較無顯著性差異。④MDA、SOD變化:與正常組相比較,模型組肝組織中SOD水平明顯低于正常組,MDA水平則明顯高于正常組(P<0.05)。榮肝合劑組可明顯提高肝組織中SOD水平,且與各干預組比較均有顯著性差異(P<0.01)。榮肝合劑、茵陳湯可降低肝組織中MDA水平(P<0.05)。⑤淋巴細胞亞群變化:CD4+CD8—T淋巴細胞所占比例,各藥物干預組與模型組比較均有升高,

8、以榮肝合劑最著,比較有顯著性差異(P<0.05)。CD4—CD8+T細胞所占比例,榮肝合劑組與模型組、聯(lián)苯雙酯組比較有顯著性差異(P<0.05)。CD4+/CD8+T細胞比例變化,與模型組相比,各中藥組均可見較大幅度升高,榮肝合劑組與茵陳蒿湯組比較有顯著性差異(P<0.05)。⑥Fas、FasL、Bax、bcl—2的變化:正常組中,F(xiàn)asL和Bax沒有表達,模型組Fas和bcl—2的表達水平與正常組比較,均有顯著差異(P<0.05)。與

9、模型組比較,榮肝合劑組Fas、FasL,、Bax、bcl—2、bcl—2/Bax比值等差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。⑦TNF—α、INF—γ、IL—4、IL—10的表達:模型組TNF—α、IFN—γ水平明顯高于正常組,而IL—4,IL—10水平明顯低于正常組(P<0.05)。榮肝合劑組TNF—α、INF—γ、IL—4、IL—10均較模型組有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。
   (2)慢性肝損傷實驗:①ALT、AST、TBiL情

10、況:與正常組比較,模型組小鼠血清ALT、AST、TBiL均顯著升高(P<0.01)。榮肝合劑、聯(lián)苯雙酯均可顯著降低血清ALT、AST及TBiL(P<0.01)。②病理組織學變化:榮肝合劑組、茵陳蒿湯組與模型組比較,在減輕肝細胞壞死、減少變性、減輕炎細胞浸潤以及減輕肝纖維化方面有統(tǒng)計學差異,榮肝合劑的作用優(yōu)于茵陳蒿湯(P<0.05)。③HBsAg、HBV DNA變化:榮肝合劑組HBV DNA水平與模型組比較有顯著性差異(P<0.05);H

11、BsAg方面,榮肝合劑組與其余各組比較均有顯著性差異(P<0.05)。④MDA、SOD變化:模型組肝組織中SOD含量明顯低于正常對照組,MDA水平明顯高于正常對照組,并有顯著性差異(P<0.01)。榮肝合劑組MDA、SOD均較模型組有統(tǒng)計學差異,較其余組比較部分有顯著差異(P<0.05)。⑤肝組織中淋巴細胞亞群變化:CD4+CD8—T淋巴細胞,各藥物干預組與模型組比較,均有升高(P<0.05);榮肝合劑與茵陳、茵陳蒿湯、聯(lián)苯雙酯比較,均

12、有顯著性差異(P<0.05);CD4—CD8+T細胞,榮肝合劑組、聯(lián)苯雙酯組與模型組比較,有顯著性差異(P<0.05);CD4+/CD8+T細胞比例變化,與模型組相比,各中藥組均可見較大幅升高,榮肝合劑組與茵陳蒿湯組、聯(lián)苯雙酯組比較有顯著性差異(P<0.05)。⑥.Fas、FasL、Bax、bcl—2的變化:正常組中,F(xiàn)asL和Bax沒有表達,模型組Fas和bcl—2的表達與正常組比較,均有顯著差異(P<0.05)。榮肝合劑組Fas、F

13、asL,、Bax、bcl—2、bcl—2/Bax比值均較模型組有統(tǒng)計學差異,較其余組比較部分指標有顯著差異(P<0.05)。⑦TNF—α、INF—γ、IL—4、IL—10的表達:模型組TNF—α、IFN—γ水平明顯高于正常組,而IL—4、IL—10水平明顯低于正常組(P<0.05)。TNF—α,榮肝合劑、茵陳組與模型組比較,均有顯著性差異(P<0.05)。IFN—γ,各藥物干預組與模型比較,均有顯著性差異(P<0.01),榮肝合劑組與茵

14、陳組、聯(lián)苯雙酯組比較,均有顯著性差異(P<0.05)。IL—4,各藥物干預組與模型比較,均有顯著性差異(P<0.05)。IL—10,榮肝合劑、茵陳組與模型組比較,均有顯著性差異(P<0.05)。
   4.治療3個月,兩組患者的ALT、AST的復常率均在80%以上,組間比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。榮肝合劑與NUCs對HBV DNA均有降低作用,但NUCs則明顯優(yōu)于榮肝合劑(P<0.05)。治療6個月后,兩組患者的ALT、A

15、ST水平均已降至正常值上限以下,組間比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05):HBV DNA方面,榮肝合劑和NUCs對HBV均持續(xù)發(fā)揮抑制作用(P<0.05),但NUCs的HBV DNA陰轉率明顯高于榮肝合劑(P<0.05)。生活質量改善方面:①治療3個月,榮肝合劑組患者生活質量各個維度均有改善:而服用NUCs在生理職能、情感職能維度無明顯改善;組間比較顯示,榮肝合劑三個月治療后,患者的生理機能、生理職能、精力、生理內容綜合測量、心理內容綜合測

16、量、SF—36總分、CLDQ各維度均較NUCs有明顯的改觀(P<0.05)。②治療6個月:榮肝合劑對于患者生活質量的改善持續(xù)起效,較基線與治療3月均有明顯好轉(P<0.05);NUCs對CHB患者生活質量亦有改善,但與基線比較,生理職能、情感職能和軀體疼痛維度無統(tǒng)計學差異;較治療3月,軀體疼痛、社會功能、一般健康狀況及情感職能、生理內容綜合測量維度無統(tǒng)計學差異(P>0.05);組間比較顯示,榮肝合劑與NUCs對患者生存質量的影響,除腹部

17、癥狀維度外,榮肝合劑均優(yōu)于NUCs(P<0.05)。
   結論:
   1.CHB治則當以清熱利濕、活血化瘀、健脾扶正為大法,榮肝合劑立法與此一致,與慢性乙型肝炎病機相契合。
   2.CHB的保肝降酶治療要真正做到對肝臟組織學的改善與降低酶學指標并重,并應該結合抗病毒、提高免疫力、防止纖維化發(fā)生、提高患者生存質量,并要加強臨床研究。
   3.通過本研究的進行,可得出以下結論:①榮肝合劑的保肝降酶作用

18、不僅是對于外周血中酶的水平的降低,同時有伴有病理組織學的改善:減輕細胞炎癥、壞死及炎細胞浸潤、甚至逆轉纖維化的作用。②中醫(yī)藥復方榮肝合劑的保肝降酶作用要明顯優(yōu)于單味中藥(茵陳湯)和聯(lián)苯雙酯,清利活血健脾的治則對于乙肝的干預是有效的。③中醫(yī)藥保肝降酶作用起效的病理機制是多方面的:可減輕細胞膜脂質過氧化反應,提高淋巴細胞亞群功能,減少炎癥因子的刺激、抑制肝細胞的凋亡。
   4.中藥榮肝合劑可使CHB患者的ALT、AST復常并降低H

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