CXCL16在免疫性肝損傷中的作用.pdf

1、本研究首先，利用抑制消減雜交技術(shù)，構(gòu)建了免疫性肝損傷基因文庫(kù)，并對(duì)基因文庫(kù)進(jìn)行大規(guī)模測(cè)序和分析。通過(guò)搜索HTGS數(shù)據(jù)庫(kù)，有4個(gè)基因?yàn)槲吹卿浀男禄颍粋€(gè)序列提交后在NCBI的登錄號(hào)為：AY601814。在基因文庫(kù)上調(diào)的基因中，還有一個(gè)CXCL16趨化因子，初步檢索和分析表明它是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的具有特殊結(jié)構(gòu)功能的趨化因子，它既能以分泌型，又能以膜結(jié)合型存在，對(duì)激活的T細(xì)胞、NK細(xì)胞及NKT細(xì)胞具有強(qiáng)烈的趨化作用，提示它可能是一個(gè)很有意義的分子

2、。 其次，為了研究CXCL16在免疫性肝損傷中的作用，選擇并復(fù)制了國(guó)際公認(rèn)的BCG-LPS誘導(dǎo)的小鼠免疫性肝損傷模型，根據(jù)血清ALT的水平、促炎癥物質(zhì)TNF-α的表達(dá)變化、肝臟組織浸潤(rùn)單核細(xì)胞的數(shù)量變化以及肝臟病理變化指標(biāo)，確定模型的成功建立。利用TaqMan探針的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)CXCL16在模型小鼠肝組織中的表達(dá)變化，同時(shí)比較了其它趨化因子在免疫性肝損傷組織的表達(dá)譜。另外，通過(guò)免疫組化定位分析，檢測(cè)了CXCL16蛋白的

3、在免疫性肝損傷組織中的表達(dá)變化和分布，比較了CXCL16的表達(dá)水平與肝臟損傷程度的相關(guān)性。 再次，為了進(jìn)一步研究CXCL16在免疫性肝損傷中的作用及其機(jī)制，克隆了CXCL16基因，通過(guò)原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)和純化CXCL16融合蛋白，免疫動(dòng)物并制備純化了它的特異性抗體。純化后的融合蛋白經(jīng)趨化實(shí)驗(yàn)表明它保持原有的生物活性，其ED50(達(dá)到50％趨化活性時(shí)的重組蛋白濃度)約為10～20ng/ml。 最后，基于CXCL16在免疫性肝