腎臟缺血預(yù)適應(yīng)對核因子κB活性及二聚體構(gòu)成的影響.pdf

1、目的:通過建立大鼠腎臟急性缺血再灌注(I/R)及腎臟缺血預(yù)適應(yīng)(IPC)模型,觀察不同缺血方式后核因子кВ(nuclear factorкВ,NF-кВ)的活性及二聚體構(gòu)成的異同,初步研究缺血預(yù)適應(yīng)對急性缺血性腎損傷的影響及可能的保護(hù)機(jī)制。
　　 方法:30只雄性SD大鼠摘除右腎、分離出左腎動(dòng)脈后隨機(jī)均分為3組:A組為假手術(shù)組(sham組,n=10),只分離左腎動(dòng)脈,暴露術(shù)野60 min后直接縫合,24 h后取腎;B組為缺血再灌

2、注組(I/R組,n=10),持續(xù)夾閉左腎動(dòng)脈45 min,恢復(fù)血供24 h后取腎;C組為缺血預(yù)適應(yīng)組(IPC組,n=10),左腎動(dòng)脈夾閉2 min,松開5 min,重復(fù)3個(gè)循環(huán),余同I/R組。分別用生化和組織學(xué)檢查評價(jià)腎臟損傷程度,免疫熒光定量分析IKKβ、IL-18的表達(dá),免疫印跡檢測腎臟組織中IKKβ、p65、p50、BCL-3的表達(dá),凝膠電泳遷移率實(shí)驗(yàn)檢測NF-кВ/DNA結(jié)合活性,超級遷移率變動(dòng)試驗(yàn)NF-кВ二聚體的構(gòu)成。

3、>　　 結(jié)果: Scr水平及腎小管損傷評分提示,I/R組腎臟組織病理改變明顯,損傷程度重,與sham組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01);與I/R組比較,IPC組損傷程度則明顯減輕,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。免疫組織化學(xué)染色檢測NGAL的表達(dá)提示,IPC組較I/R組明顯表達(dá)減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。免疫熒光定量分析及免疫印跡檢測IKKB的表達(dá)均提示,IPC組較I/R組明顯減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.0

4、5)。熒光定量分析檢測IL-18的表達(dá)提示,IPC組較I/R組表達(dá)減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。凝膠遷移率實(shí)驗(yàn)檢測NF-кВ/DNA結(jié)合活性提示,IPC組NF-кВ/DNA結(jié)合活性較I/R組明顯減低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。超級遷移率變動(dòng)試驗(yàn)提示,IPC組及I/R組NF-кВ二聚體均含有p65及p50。免疫印跡檢測檢測p65的表達(dá)提示,p65在I/R組的表達(dá)較IPC組高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。免疫印

5、跡檢測檢測p50的表達(dá)提示,p50在IPC組的表達(dá)較I/R組升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。免疫印跡檢測檢測Bcl-3的表達(dá),Bcl-3在IPC組的表達(dá)較I/R組明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、腎臟缺血預(yù)適應(yīng)減少IKKβ的表達(dá),抑制部分NF-кВ/DNA結(jié)合活性。
　　 2、腎缺血預(yù)適應(yīng)促進(jìn)p50/p50同源二聚體活化,減少腎損傷標(biāo)志物IL-18、NGAL的表達(dá)。