交配反應(yīng)與簡并PCR在黑木耳遺傳分析中的應(yīng)用.pdf

1、本文在前期對全國黑木耳主要栽培菌株進行酯酶同工酶和DNA分子指紋(ISSR、SRAP)分析中發(fā)現(xiàn)，部分菌株如新科1號與新科5號、菌株139與菌株8129的相似水平較高，極可能存在同物異名現(xiàn)象。為了深入研究黑木耳栽培菌株的鑒別技術(shù)和方法，采用交配反應(yīng)和簡并PCR技術(shù)，對部分黑木耳栽培菌株的親本及F<,1>代進行了遺傳分析。 以栽培菌株新科1號與新科5號(第Ⅰ組)、139與8129(第Ⅱ組)、新科5號與黑29(第Ⅲ組)為材料，分別通

2、過原生質(zhì)體單核化和單孢分離技術(shù)得到親本及其F<,1>代單核體，鑒定交配型。分別對各組材料進行菌株內(nèi)、菌株間F<,1>代單核體-親本的交配試驗，統(tǒng)計親和率。以每組兩對親本與各菌株Fl代單核體的親和情況為基準，計算親本交配型因子的遺傳相似性系數(shù)并進行聚類分析。結(jié)果表明：第Ⅰ組菌株新科1號與新科5號交配型基因很相似，XK1-S70與XK5-P55的遺傳相似性系數(shù)達0.96，XK1-P11與XK5.P32之間為0.75。同樣，第Ⅱ組菌株139-

3、S46與8129-S22、139-S13與8129-S8的遺傳相似性系數(shù)分別為0.93、0.86。第Ⅲ組菌株黑29與新科5號的單核體配對，均可親和。新科5號親本與子代的比較分析表明，經(jīng)過減數(shù)分裂階段擔孢子染色體組的交換，子代的交配型基因發(fā)生了一定的遺傳重組。結(jié)果表明，黑木耳菌株問交配型座位內(nèi)的等位基因存在不同程度的差異，其中第Ⅰ、Ⅱ組菌株等位基因的相似程度較高，第Ⅲ組菌株的差異較大；交配型因子存在著遺傳變異現(xiàn)象；交配型標記應(yīng)用于菌株鑒別

4、具有可行性。 應(yīng)用ISSR分子標記對黑木耳單核體進行了遺傳分析。從73條ISSR引物中篩選出13條可區(qū)分新科5號親本單核體(T<,1>、T<,2>)的引物，對新科5號及F<,1>代孢子單核體進行擴增，共擴增出70條帶，其中63條在供試菌株間表現(xiàn)出多態(tài)性，多態(tài)位點百分率為90.0％。根據(jù)擴增結(jié)果采用軟件NTSys 2.10e計算遺傳相似系數(shù)并進行聚類分析，36個供試材料間的GS值變化范圍為0.25～0.83，其中T<,1>和T<,

5、2>之間的GS值最小，遺傳相似程度最低；F<,1>代33個孢子單核體中24個與T<,1>聚為一類，其余9個與T<,2>聚為另一類，但并非嚴格按照交配型進行歸類。試驗表明黑木耳子實體上各個擔子在減數(shù)分裂中染色體交換極具多樣性，F(xiàn)<,1>代單核體表現(xiàn)出偏向其中一個親本的現(xiàn)象，而交配型因子可能由可交換的亞單位組成。 為獲得與黑木耳交配型基因相關(guān)的分子標記，采用依據(jù)信息素受體的保守氨基酸序列設(shè)計的簡并引物組合brl-F與brl-R進行擴