非綜合征性聾Myo6基因突變特征及促紅細胞生成素對耳聾作用的研究.pdf

1、本文分為三部分：
　　 第一部分：My06突變與非綜合征性語前聾相關性研究
　　 研究背景：人類從外界獲取的信息中30％來自聽覺，聽力喪失無疑嚴重影響人類的生活質(zhì)量，并且伴隨人的一生。耳聾是人類最常見的感覺神經(jīng)系統(tǒng)缺陷。學語前耳聾是兒童的常見疾病，可導致患兒語言交流障礙，嚴重影響患兒的語言、智力、身心健康等的發(fā)育，影響著我國人口素質(zhì)。據(jù)估計每1000名新生兒中就有1名先天性耳聾患者，隨著年齡的增加，永久性耳聾患兒持續(xù)增加

2、，5歲前耳聾患兒的發(fā)病率上升到2．7‰。其中60％為遺傳性聾，而不伴隨全身其他癥狀的非綜合征性聾(nonsyndromic hearing impairment NSHI)約占遺傳性耳聾的70％。引起耳聾的病因很多，其中遺傳因素是不可忽視的病因。目前已發(fā)現(xiàn)許多基因突變與耳聾有關，現(xiàn)已知非綜合征性致聾基因有62個，其中隱性遺傳致病基因37個，顯性遺傳基因25個。而所有遺傳因素和環(huán)境因素致聾在同一種族以及不同種族之間會有極大的差異，即遺傳異

3、質(zhì)性。語前聾的發(fā)病原因及其發(fā)病機制一直是國內(nèi)外耳鼻咽喉科醫(yī)師、分子生物學家、遺傳優(yōu)生醫(yī)師和學者們共同關注的熱點問題。
　　 目的：探討中國兒童非綜合征性學語前聾患者肌球蛋白6(myosin 6，My06)基因的突變頻率和特性，探討My06在非綜合征性耳聾的作用。
　　 方法：收集非綜合征性學語前聾患兒及其母親各41個及聽力正常兒童50例，患兒家庭大部分來自廣東地區(qū)，共計132例；聚合酶鏈反應擴增肌球蛋白6基因的外顯子，變

4、性梯度凝膠電泳(denaturing Gradient Gel electrophoresis，DGGE)篩查變異，發(fā)現(xiàn)異常構象帶后再行DNA測序確定是否存在突變和檢測突變的位點。
　　 結果：在2個患兒母親和1例患兒中檢測出了My06基因突變。10號樣本為患兒家長，My06基因9號外顯子雜合突變738T-T/C，其編碼的氨基酸無改變，為無義突變。
　　17號樣本為患兒家長，有兩個突變位點：My06基因9號外顯子雜合突變

5、739A-A/G，其編碼氨基酸發(fā)生了改變Ile-Val[異亮氨酸-頡氨酸]，為錯義突變；My06基因13號外顯子雜合突變1292T-T/C，其編碼氨基酸發(fā)生了改變leu-*pro[亮氨酸-脯氨酸]，為錯義突變。33號樣本為患兒，有兩突變位點：My06基因9號外顯子雜合突變711T-T/C，其編碼氨基酸沒發(fā)生改變，為無義突變；32號外顯子純合突變3281A-'-G，其編碼的氨基酸發(fā)生了改變Asp-Gly[天冬氨酸-甘氨酸]，為錯義突變。并

6、且17號和33號是母子關系。
　　 結論：My06基因的純合錯義突變(3281A-G)很可能是導致非綜合征性學語前聾的一個新突變，屬于常染色體隱性遺傳。
　　 第二部分：促紅細胞生成素對豚鼠耳蝸傳入神經(jīng)元毒性損傷的影響
　　 研究背景：根據(jù)聽覺系統(tǒng)所受影響的性質(zhì)、原因和病變位置可將耳聾分為傳導性聾、感音神經(jīng)性聾和二者兼有的混合性聾3大類。由外耳和(或)中耳疾病或結構異常所致的集音或傳音障礙引起的聽覺功能減退稱為傳

7、導性耳聾可通過聽力重建手術來保存和恢復聽力，而感音神經(jīng)性耳聾是一大類常見的難治性、致殘性疾病，由于缺乏有效治療方法，因聾致殘者不在少數(shù)。而降低感音神經(jīng)性耳聾發(fā)病率最有效的策略是控制耳聾的增加和提供有效的治療方法。近年已證實，谷氨酸興奮毒性是神經(jīng)系統(tǒng)損傷的主要病理機制之一，各種原因引起的耳蝸缺血或噪聲損傷的一個重要致聾機理是谷氨酸(glutamate，Glu)興奮毒性對耳蝸的損害，即：上述病例狀態(tài)下耳蝸內(nèi)毛細胞釋放興奮性傳入神經(jīng)遞質(zhì)Glu

8、過多或／和回收不充分，谷氨酸與突觸后膜受體的作用，導致神經(jīng)元過度興奮，鈣超載、細胞內(nèi)氧自由基的增多，導致以傳入神經(jīng)元樹突水腫為特征的興奮性損害而導致神經(jīng)元的大量死亡，出現(xiàn)大幅聽力下降，重者因遲發(fā)性傳入神經(jīng)元死亡致不可逆神經(jīng)性聾。因此減少神經(jīng)元的凋亡是最直接和最有效的治療措施。
　　 目的：觀察谷氨酸致豚鼠耳蝸傳入神經(jīng)元興奮毒性損傷后，耳蝸局部灌注促紅細胞生成素(Erythropoietin，EPO)對耳蝸傳入神經(jīng)元的電生理(復合

9、動作電位CAP)的影響。
　　 方法：26只豚鼠分為4組。第一組(8只)：先用微量輸液泵經(jīng)鼓階持續(xù)性灌注谷氨酸(glutamate，Glu 20mmol/1，fOul)。60分鐘后用微量滲透泵經(jīng)鼓階持續(xù)性灌注EPO(0.1U／m1，流速0.5ul/h)14天，作為實驗組(EPO組)；第二組(8只)：經(jīng)鼓階灌注谷氨酸(20mmol/1，lOul)作為實驗對照組(Glu組)；第三組(5只)：用微量滲透泵經(jīng)鼓階灌注Hanks液做為正常

10、對照組(HBSS組)；第四組(5只豚鼠)：不作任何灌注作為空白對照組(Blank組)。EPO組、Glu組和HBSS組分別在術后1天、術后4周測CAP反應閾，空白對照組測CAP反應閾后處死。
　　結果：1、術后1天EPO組、Glu組CAP反應閡增高，與HBSS和Blank組有顯著性差異(P<0.01)；2、術后4周EPO組CAP反應閾無降低；3、HBSS組、Blank組CAP反應閾無顯著性差異(P>O.05)。
　　 結論

11、：1．局部灌注谷氨酸對螺旋神經(jīng)節(jié)細胞有明顯的神經(jīng)毒性；2．局部灌注EPO沒有起到對耳蝸神經(jīng)節(jié)的保護作用。
　　 第三部分：3歲以內(nèi)嬰幼兒氣管／支氣管異物的異同點比較
　　 研究背景:3歲以內(nèi)的嬰幼兒常常容易把能拿到的一些小食物含在口中，而磨牙系統(tǒng)發(fā)育不完善、喉的保護功能不健全、缺少咀嚼和活潑好動、哭笑等性格因素，在缺少監(jiān)護或者監(jiān)護不力及其他意外等情況時易出現(xiàn)誤吸而導致氣管/支氣管異物的發(fā)生。3歲以內(nèi)的嬰幼兒是最易發(fā)生氣管

12、和支氣管異物的人群，其中該年齡段7％嬰幼兒的意外死亡與誤吸異物有關，但即使都是氣管異物患兒，不同年齡段的特點也不盡相同，3歲以內(nèi)不同年齡段患兒氣管異物發(fā)病機制和臨床表現(xiàn)的差異少有研究和報道。
　　 目的:通過比較3歲以內(nèi)嬰幼兒氣管/支氣管異物的臨床資料，總結3歲以內(nèi)嬰幼兒每一年齡段誤吸異物后各自臨床表現(xiàn)和差異，總結3歲以內(nèi)嬰幼兒氣管/支氣管異物的臨床特點，以進一步提高診療水平。
　　 方法:回顧性分析2004年1月～20

13、08年12月間在深圳市兒童醫(yī)院確診和治療的3歲以內(nèi)的嬰幼兒氣管、支氣管異物316例的臨床資料。通過比較不同組別患兒的性別、年齡、異物分布部位、治療史、異物吸入史，異物種類和致死原因等，同時還分析合并并發(fā)癥患兒異物在體內(nèi)滯留時間及異物取出的后果差異。
　　 結果:1歲以內(nèi)嬰兒有52例（中位數(shù)年齡為10個月，A組），1～2歲患兒199例（中位數(shù)年齡為17個月，B組），2～3歲患兒65例（中位數(shù)年齡30個月，C組）。A組有明確異物誤吸

14、史者有38例(73.1％)，較B組(55.8％)和C組(53.8％)高(P＜0.05)。最常見的異物為花生（171例，54.1％）;其次為瓜子（包括葵瓜子、西瓜子和南瓜子）62例(19.6％);第三位異物種類為動物性異物有35例(11.1％)（包括16例豬骨，8例魚骨，7例雞骨和4例其他動物肉），且A組動物性異物的發(fā)生比例明顯高于B和C組(P＜0.01)。最少的異物種類為無機異物，共5例（圖釘一個，橡皮擦一個，螺絲釘一個，小石子一個，塑

15、料玩具一個）。異物于支氣管內(nèi)的分布沒有明顯的左、右側(cè)差異，左側(cè)異物發(fā)生率為41.8％，右側(cè)異物發(fā)生率為40.5％，三組不同年齡段患兒異物左、右側(cè)分布也無顯著性差異。數(shù)據(jù)顯示，A組（0-1歲）患兒24小時內(nèi)被送往醫(yī)院接受治療比例(50％)最高(P＜0.01)。本組病例中有5個患兒（死亡率:1.58％）因誤吸異物而死。
　　 結論:在中國南方1歲以內(nèi)嬰兒階段最常見的異物為動物性異物。最易發(fā)生氣管/支氣管異物的人群為1至2歲的幼兒。3