低劑量輻射對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢特性的影響.pdf

1、本文主要從以下幾部分展開: 第一部分：人胎兒骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離純化及基本生物學(xué)特性研究 目的：觀察人胎兒骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(FMSCs)體外分離、培養(yǎng)方法，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行初步分析。 方法：取4個(gè)月胎齡的流產(chǎn)胎兒，無菌條件下分離胎兒四肢骨，PBS沖洗骨髓腔；采用Ficoll法分離胎兒骨髓腔沖洗液，離心后取單個(gè)核細(xì)胞層培養(yǎng)、擴(kuò)增、傳代，觀察細(xì)胞生物學(xué)特性；采用MTT法觀察細(xì)胞生長曲線及分裂指數(shù)曲線。取第3代細(xì)胞

2、，在含新生牛血清、地塞米松、β-甘油磷酸鈉、抗壞血酸的DMEM-LG培養(yǎng)基中誘導(dǎo)其成骨分化；在含新生牛血清、地塞米松、胰島素的DMEM-LG培養(yǎng)基中誘導(dǎo)其成脂分化。 結(jié)果：接種48h后，貼壁細(xì)胞呈梭形、多角形、成纖維細(xì)胞樣形態(tài)。10天后開始傳代，傳代培養(yǎng)的潛伏期為24-36h，對(duì)數(shù)增殖期約為2-3天，第6天進(jìn)入平臺(tái)期。傳代至15代后生長速度變慢；FCM檢測(cè)顯示，細(xì)胞高表達(dá)CD29、CD44及CD49e分子，低表達(dá)CD106、CD

3、54、CD11b，而不表達(dá)CD34。成骨、成脂培養(yǎng)基誘導(dǎo)3周后，Von Kossa染色呈黑色，油紅染色成橘紅色。 結(jié)論：采用Ficoll密度梯度離心、貼壁篩選法及單克隆培養(yǎng)法可以分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增出具有高度同源性的胎兒骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；并在體外成功的誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞分化。 第二部分：低劑量輻射對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體內(nèi)分布和歸巢特性的影響 目的：觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療脊髓損傷動(dòng)物模型及經(jīng)X線照射后的分布和歸

4、巢特性。 方法：取部分昆明小鼠做骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMMSCs)分離培養(yǎng)；部分按照改良的Allen's打擊法建立脊髓損傷模型，并隨機(jī)分成照射組和對(duì)照組：CFDA SE標(biāo)記后的原代BMMSCs于照射組照射后30min時(shí)，給所有脊髓損傷模型的損傷局部進(jìn)行細(xì)胞移植。分別于細(xì)胞移植后24h和96h在熒光顯微鏡下觀察BMMSCs移植后在受者體內(nèi)的分布及歸巢特性。 結(jié)果：細(xì)胞移植24h后，所有脊髓損傷模型的損傷部位均可見被植入的BM