肺癌分子細胞病理學(xué)的應(yīng)用研究.pdf

1、研究目的：
　　 1．探討與形態(tài)結(jié)合的M-FISH技術(shù)在輔助纖維支氣管鏡(fiberoptic bronchoscopy，F(xiàn)OB)細胞學(xué)診斷肺癌的價值。
　　 2．采用肺癌相關(guān)細胞學(xué)標本檢測EGFR和k-ras基因突變的可行性。
　　 材料與方法：
　　 1．選取7、8及17號染色體特異性著絲粒探針(CEP7、CEP8和CEP17)，對69例中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院病理細胞室FOB細胞學(xué)標本進行與細胞學(xué)形態(tài)

2、學(xué)相結(jié)合的M-FISH檢測。
　　 2．收集50例中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院病理細胞室FOB細胞學(xué)標本、細針穿刺（fine-needle aspiration，F(xiàn)NA）標本和胸水(pleural effusion，PLE)標本，采用PCR技術(shù)擴增EGFR基因18-21外顯子和k-ras基因12、13號密碼子，然后對擴增片段進行測序和分析。
　　 結(jié)果：
　　 1．與細胞學(xué)形態(tài)學(xué)相結(jié)合的M-FISH檢測
　　

3、(1)在癌病例中，CEP7、CEP8和CEP17的FISH檢測陽性率分別為50.0％(16/32)、80.8.%(21/26)和65.4%(17/26)，CEP8與CEP7的陽性率有明顯差異(P=0.015)，而CEP8與CEP17，CEP7與CEP17的陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。在可疑癌病例中，CEP7、CEP8和CEP17的FISH檢測陽性率分別為46.6%(7/15)66.7%(10/15)和58.8%(7/12)。

4、在非典型病例中，CEP7、CEP8和CEP17的FISH檢測陽性率分別為20.0%(1/5)、33.3(2/6)和25.0%(1/4)。三種探針在可疑癌和非典型兩組病例間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；三種探針在癌與可疑癌兩組病例間的陽性率差異也無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；所有正常細胞均未見染色體改變。
　　 (2)CEP7、CEP8和CEP17三種探針在腺癌中的陽性率均高于在鱗癌和小細胞癌的陽性率，但僅CEP8探針在腺癌

5、中陽性率與其在小細胞癌的陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.044)。
　　 (3)FOB細胞學(xué)診斷肺癌的敏感性為54.1%(33/61)，若以CEP7、CEP8、CEP17任意一個探針陽性為M-FISH陽性，細胞學(xué)結(jié)合M-FISH可使診斷敏感性提高至80.3%(49/61)，且不降低細胞學(xué)診斷的特異性(100.O%)。
　　 2．EGFR和k-ras基因突變檢測
　　 (1)50例細胞學(xué)標本中，DNA提取的滿意率為

6、86.0%(43/50)，其中42例有特異性PCR擴增產(chǎn)物可以進行測序。
　　 (2)EGFR基因總突變率為33.3%(14/42)。其中第19外顯子突變率為16.7%(7/42)，第20外顯子突變率為4.8%(2/42)，第21外顯子突變率為11.9%(5/42)，未檢出第18外顯子突變。EGFR19和21外顯子突變占EGFR突變總數(shù)的85.7%(12/14)，顯著高于EGFR20外顯子突變(P=0.03)。
　　 (

7、3)EGFR女性突變率47.8%(11/23)顯著高于男性(15.8%,3/19)(P=0.028)；非吸煙患者突變率為53.3%(8/15)顯著高于吸煙患者(22.2%，6/27)(P=0.040)；腺癌患者突變率為38.7%(12/31),3例非肺癌患者未見EGFR基因突變。
　　 (4)k-ras基因突變率為4.8%(2/42)，均為第12號密碼子替代突變。
　　 (5)未發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變與k-ras基因突變共