香煙煙霧上調(diào)大鼠肺組織和RLE-6TN細(xì)胞D4-GDI表達(dá).pdf

1、【目的】：檢測(cè)D4-GDI在被動(dòng)吸煙大鼠肺組織以及CSE處理的RLE-6TN細(xì)胞的表達(dá)水平變化，從而初步探索D4-GDI是否參與了吸煙相關(guān)性COPD的發(fā)病機(jī)制。
　　【方法】：
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分：取40只雄性SD大鼠，按隨機(jī)原則分成4組，每組10只，按照本實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)方法復(fù)制被動(dòng)吸煙大鼠模型，檢測(cè)肺功能，收集對(duì)照組、被動(dòng)吸煙2個(gè)月組、被動(dòng)吸煙4個(gè)月組、被動(dòng)吸煙4個(gè)月戒煙1個(gè)月組(戒煙組)大鼠的肺組織標(biāo)本，HE染色觀察肺組織

2、結(jié)構(gòu)，用免疫組織化學(xué)、反轉(zhuǎn)錄-PCR（RT-PCR）、Western blot方法檢測(cè)D4-GDI的表達(dá)水平。
　　2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分：用香煙提取物處理RLE-6TN(大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞)0h、3h、6h、12h、24h，用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)、反轉(zhuǎn)錄-PCR（RT-PCR）、Western blot方法檢測(cè)D4-GDI的表達(dá)水平。
　　【結(jié)果】：
　　1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分：HE染色示對(duì)照組肺組織結(jié)構(gòu)無(wú)明顯破壞，吸煙2個(gè)月組肺

3、泡壁完整性受損，吸煙4個(gè)月組肺組織結(jié)構(gòu)破壞最明顯，戒煙組肺組織結(jié)構(gòu)破壞稍有好轉(zhuǎn)，但較吸煙4個(gè)月組無(wú)明顯變化。RT-PCR結(jié)果顯示D4-GDI表達(dá)最弱的為對(duì)照組(1.21±0.06)，接下來(lái)是吸煙2個(gè)月組（2.09±0.07），吸煙4個(gè)月組D4-GDI表達(dá)最強(qiáng)（2.45±0.12），戒煙組(1.84±0.05)較吸煙2個(gè)月組、吸煙4個(gè)月組表達(dá)減少但仍強(qiáng)于對(duì)照組，各組間兩兩比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P均<0.05。Western blot趨勢(shì)同

4、RT-PCR結(jié)果，從弱到強(qiáng)分別為（0.30±0.06、0.79±0.15、1.03±0.06、1.46±0.11），各組間兩兩比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， P均<0.05。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示D4-GDI廣泛表達(dá)于除支氣管上皮細(xì)胞以外的各種肺組織細(xì)胞，4組間的表達(dá)強(qiáng)度變化趨勢(shì)為表達(dá)最弱的為對(duì)照組，其次是吸煙2個(gè)月組，吸煙4個(gè)月組D4-GDI表達(dá)最強(qiáng)，戒煙組較吸煙2個(gè)月組、吸煙4個(gè)月組表達(dá)減少但仍強(qiáng)于對(duì)照組，變化趨勢(shì)同Western blo

5、t結(jié)果一致。
　　2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分：RT-PCR結(jié)果顯示10％CSE處理不同時(shí)間，隨著CSE處理時(shí)間的延長(zhǎng)，D4-GDI的mRNA表達(dá)在0h組、3h組為（0.31±0.01、0.40±0.02），在12h組（0.69±0.05）最高，24h組（0.60±0.03）低于12h組但仍高于6h組（0.52±0.04），不同時(shí)間點(diǎn)組之間兩兩比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P均<0.05， Western blot結(jié)果顯示10%CSE處理不同時(shí)間，隨

6、著CSE處理時(shí)間的延長(zhǎng)，D4-GDI的表達(dá)逐漸增高，分別為（0.44±0.06、0.78±0.08、1.11±0.12、1.37±0.07、1.65±0.13），在24h組最高，不同時(shí)間點(diǎn)組之間兩兩比較，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， P均<0.05，免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)結(jié)果與Western blot結(jié)果一致。
　　【結(jié)論】：
　　吸煙導(dǎo)致D4-GDI在肺組織和RLE-6TN中表達(dá)增高，D4-GDI可能參與了吸煙相關(guān)性COPD的發(fā)病機(jī)