腺相關(guān)及腺病毒內(nèi)耳基因轉(zhuǎn)染和Rb敲除結(jié)合ISL1表達(dá)誘導(dǎo)小鼠毛細(xì)胞與支持細(xì)胞增殖.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文腺相關(guān)及腺病毒內(nèi)耳基因轉(zhuǎn)染和Rb敲除結(jié)合ISL1表達(dá)誘導(dǎo)小鼠毛細(xì)胞與支持細(xì)胞增殖姓名：舒易來(lái)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉科學(xué)指導(dǎo)教師：王正敏20120410復(fù)旦大學(xué)博士論文Rbl并過(guò)表達(dá)內(nèi)耳前體細(xì)胞基因ISLI誘導(dǎo)新生及成年小鼠耳蝸毛細(xì)胞與支持細(xì)胞的增殖的研究。第一部分：5型腺病毒經(jīng)中階路徑注射轉(zhuǎn)染新生和成年小鼠耳蝸毛細(xì)胞和支持細(xì)胞的評(píng)價(jià)【目的】為了研究5型腺病毒攜帶目的基因經(jīng)新生和成年小鼠中階入路導(dǎo)入轉(zhuǎn)染內(nèi)耳細(xì)

2、胞的可行性，為以小鼠為動(dòng)物模型的內(nèi)耳基因治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和解剖學(xué)依據(jù)【方法】采用納升級(jí)顯微操作系統(tǒng)，經(jīng)中階顯微注射攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EnhancedGreenFluorescentProteinEGFP)基因的5型重組腺病毒或人工內(nèi)淋巴液于各年齡段的小鼠耳蝸(pl，p4，p7，p12，p21，卜2M)，內(nèi)耳注射4天后取雙側(cè)耳蝸標(biāo)本做基底膜鋪片，觀察EGFP表達(dá)情況?！窘Y(jié)果】p1、P4、P7組：術(shù)后第4天見耳蝸底圈、中圈支持細(xì)胞表達(dá)

3、GFP。p12、p21、I2M組：術(shù)后第4天可見耳蝸底圈、中圈支持細(xì)胞及部分內(nèi)毛細(xì)胞表達(dá)EGFP。在人工內(nèi)淋巴液和未注射耳，未見EGFP表達(dá)。【結(jié)論】采用經(jīng)中階入路顯微注射5型腺病毒攜帶目的基因?qū)胄律蠹俺赡晔竽軌驅(qū)⒛康幕虺晒D(zhuǎn)染至耳蝸組織并表達(dá)。第二部分：12種腺相關(guān)病毒經(jīng)中階路徑注射轉(zhuǎn)染新生和成年小鼠耳蝸毛細(xì)胞和支持細(xì)胞的比較【目的】為了比較12種腺相關(guān)病毒攜帶目的基因經(jīng)新生和成年小鼠中階入路導(dǎo)入內(nèi)耳的可行性，尋找新的更安全的載