TOP2A、DUSP6基因多態(tài)性與非小細胞肺癌易感性、腫瘤退縮率及預后相關因素研究.pdf

1、目的：
　　本研究采取以醫(yī)院為基礎的病例對照研究方法，共計收錄了有明確病理診斷的NSCLC病人456例，健康對照組462例。研究的第一部分探討TOP2A rs471692、DUSP6 rs2279574多態(tài)性與中國漢族人群肺癌遺傳易感性的關聯(lián)性?；谶x取位點所在基因功能與細胞增殖相關，可能同時影響肺癌的放射敏感性及預后，所以本研究的第二部分是探討基因多態(tài)性與NSCLC預后的關聯(lián)性。第三部分探討放療中腫瘤退縮率與這兩個位點多態(tài)性的關

2、聯(lián)性，并對行根治性放療治療為主的Ⅰ-Ⅲ期NSCLC病人，探討性別、年齡、腫瘤生長部位、腫瘤體積、病理類型、分期等臨床病理因素及放療中腫瘤退縮速率與NSCLC預后的關系。
　　方法：
　　一、研究對象
　　1、TOP2A、DUSP6基因多態(tài)性與肺癌遺傳易感性的相關性研究
　　研究對象為相互間無血緣關系的中國北方漢族人群（以遼寧省為中心，包括周圍臨近地區(qū)），均簽署知情同意書，提供血液標本同時，完成流行病學調(diào)查。采用病

3、例對照研究方法，病例組來自中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院、沈陽軍區(qū)總醫(yī)院和遼寧省腫瘤醫(yī)院的456名NSCLC患者，有明確的病理診斷，462名對照來自同期沈陽軍區(qū)總醫(yī)院體檢中心的健康體檢人群，性別與病例頻數(shù)匹配。因2名NSCLC患者和8名健康對照者基因分型失敗，最終共計454例NSCLC和健康對照納入研究，所有病例和對照均在2009年6月至2012年12月期間募集。
　　2、TOP2A、DUSP6基因多態(tài)性與肺癌預后的相關性研究
　

4、　研究對象為在2009年6月至2012年12月期間來自中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院、沈陽軍區(qū)總醫(yī)院和遼寧省腫瘤醫(yī)院的454名原發(fā)性肺癌患者，失訪15例，共計429例病人納入研究，入組研究的病例均有明確的病理診斷，其中男314例，女115例;年齡34～87歲，平均60歲，均取得病理學或細胞學診斷，鱗癌228例，腺癌201例，Ⅰ期59例，Ⅱ期67例，Ⅲ期208例，Ⅳ期92例，非手術(shù)病人227例，手術(shù)病人152例。
　　3、非小細胞肺癌放療

5、中腫瘤退縮率與TOP2A、DUSP6基因多態(tài)性及預后的相關性研究
　　研究對象為在2009年6月至2012年12月期間來自中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院的原發(fā)性肺癌患者，共計140例病人納入研究，入組研究的病例均有明確的病理診斷，其中男105例，女35例;年齡31～82歲，平均60歲，均取得病理學或細胞學診斷，鱗癌89例，腺癌51例，Ⅰ期6例，Ⅱ期36例，Ⅲ期76例，Ⅳ期22例，原發(fā)NSCLC病人106例，術(shù)后復發(fā)34例。
　　二

6、、研究方法
　　采用統(tǒng)一制定調(diào)查表，由兩名培訓的調(diào)查員對病例及對照進行流行病學調(diào)查，調(diào)查內(nèi)容包括每個研究對象詳細的流行病學資料，包括年齡，性別，體重，吸煙史，飲食等生活習慣，家族患癌史，職業(yè)史等。臨床資料包括:確診時間，手術(shù)時間，放療或化療時間，復發(fā)時間，死亡時間，腫瘤部位，病理類型，腫瘤分化程度，臨床分期，治療策略等。非吸煙者指終生吸煙少于100支的個體，現(xiàn)在吸煙者指發(fā)病前12個月內(nèi)仍在吸煙者，其余則歸為曾經(jīng)吸煙者?；颊叩碾S訪記

7、錄通過門診，電話隨訪或病案查閱的方式進行。
　　行三維適形放療的NSCLC病人，用放射治療計劃系統(tǒng)計算放療前原發(fā)腫瘤靶體積(GTV)，放療40Gy/20f后，重新進行CT定位復查，在計劃系統(tǒng)中采用交互信息法進行CT-CT配準（放療40 Gy的CT與放療前CT配準），參考配準圖像進行靶區(qū)勾畫，根據(jù)腫瘤大小變化重新勾畫腫瘤靶區(qū)GTVs。
　　所有參與研究的個體外周血標本采集使用枸櫞酸鈉抗凝試管，每人采血約2ml，經(jīng)-20℃或-8

8、0℃冰箱的凍存，集中進行基因組DNA提取，方法采用酚-氯仿法，提取后測OD值確定DNA的原始濃度，再倍比稀釋到30-100ng/μl的終濃度備用。采用Taqman real-time PCR方法進行單核苷酸多態(tài)性的基因分型。
　　三、統(tǒng)計分析
　　利用SPSS13.0軟件進行數(shù)據(jù)整理分析，所有的統(tǒng)計檢驗均以P＜0.05為有統(tǒng)計學顯著性差異。以x2檢驗檢查比較人口學特征、相關危險因素暴露及SNPs基因型在病例與對照之間分布的差

9、異;以擬合優(yōu)度x2檢驗檢查對照的Hardy-Weinberg分布平衡情況;以單因素和多因素logistic回歸計算比值比(oddsratio，OR)及95％可信區(qū)間(confidence interval，CI)。用Haploview軟件計算SNPs的連鎖不平衡指數(shù)?；?吸煙之間的交互作用根據(jù)Likelihood ratio檢驗計算。生存時間定義為確診日期至死亡日期或最近一次隨訪日期（2014年1月）。以Kaplan-Meier方法繪

10、制生存曲線并以Log-rank檢驗生存時間之間的差異。單因素和多因素Cox回歸計算風險比例(Hazard Ratios，HR)及其95％可信區(qū)間(Confidence Intervals，CI)?？ǚ綑z驗被用來分析死亡和存活的患者不同變量之間的差異。以t檢驗和方差分析分別比較性別、年齡、療前體重下降程度、KPS評分、腫瘤部位、病理類型、分期及基因型與放療中腫瘤退縮率關系。
　　結(jié)果：
　　本研究第一部分檢測的2個SNPs基因

11、型在對照組的分布頻率經(jīng)x2檢驗，符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（P＞0.05）。DUSP6 rs2279574有三種單體型，C/C（野生型）、C/A型、A/A型。以rs2279574的基因分型情況進行Logistic回歸分析表明，相對于C/C基因型攜帶者，攜帶A/A和A/C基因型者的OR及95％CI分別為1.571(1.050-2.349)和1.415(0.948-2.112)，P值分別為0.028和0.090;合并A/A

12、和C/A后的OR及95％CI為1.489(1.022-2.169)。調(diào)整年齡、吸煙狀況因素后上述OR及95％CI分別為1.836(1.180-2.857)、1.758(1.131-2.731)、1.796(1.187-2.716)，P值分別為0.007，0.012和0.006;提示rs2279574位點的A等位基因是肺癌的風險等位基因，攜帶A/A和C/A單體型的個體發(fā)生肺癌的危險增加。進一步根據(jù)組織學分層發(fā)現(xiàn)，A/A和C/A基因型增加肺

13、鱗癌風險，OR值和95％CI分別為2.270(1.268-4.062)和2.096(1.175-3.741)，同時合并A/A和C/A基因型的OR值和95％CI為1.564(0.977-2.503)，調(diào)整年齡、吸煙狀況因素后上述OR及95％CI分別為2.270(1.268-4.062)、2.096(1.175-3.741)、2.180(1.263-3.761)，P值分別為0.006，0.012和0.005;提示rs2279574單核苷酸多

14、態(tài)性的A等位基因是肺鱗癌的風險等位基因，攜帶A/A和C/A單體型的個體發(fā)生肺鱗癌的危險增加。
　　本研究的第二部分是探討TOP2A和DUSP6基因多態(tài)性與NSCLC預后的相關性，對454例NSCLC患者進行隨訪，截止2014年1月，中位隨訪期為19個月（1～84個月），15例失訪，隨訪率為94.5％。利用Cox多重回歸模型分析計算風險率(Hazard Ratio，HR)、P值、中位生存期(Median Survival Time，

15、MST)、對數(shù)秩檢驗(Log-rank Test)P值和Kaplan-Meier生存曲線等數(shù)據(jù)分析。卡方檢驗被用來分析死亡和存活的患者不同變量之間的差異。總共有429例進入分析，在這些NSCLC患者中有323例(75.3％)死亡，106例存活，中位生存期(MediumSurvival Time，MST)為19個月，1、2、3年生存率分別為65.2％、44.2％、31.9％。
　　第三部分研究探討放療中腫瘤退縮率與這兩個位點的單核甘

16、酸多態(tài)性的關系，本研究中NSCLC患者共140例，TOP2A rs471692位點基因型C/C、C/T、T/T分布頻率分別是47.9％、45.7％、6.4％; DUSP6 rs2279574位點基因型A/A、A/C、C/C分布頻率分別是46.4％、42.9％、10.7％。各基因型與研究對象的性別、年齡、吸煙狀態(tài)、腫瘤部位、T分期、N分期、臨床分期及病理類型均無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。放療中期腫瘤退縮率平均值為0.34cm3，其中有3

17、例患者放療中期腫瘤體積GTVs較放療前體積GTV增大。TOP2A rs471692 C/C、C/T、T/T基因型攜帶者放療中期腫瘤平均退縮率分別為35.5％、33.8％、45.7％，經(jīng)方差分析比較無統(tǒng)計學差異(F=1.455 P=0.237)。合并C/T、T/T基因型，與攜帶C/C基因型個體比較，經(jīng)t檢驗分析也無統(tǒng)計學差異(t=-1.634，P=0.105)。
　　結(jié)論：
　　1、DUSP6 rs2279574位點基因多態(tài)性

18、與肺癌易感性相關，攜帶A等位基因可增加肺鱗癌發(fā)病風險，并且和中晚期肺癌相關。
　　2、DUSP6 rs2279574位點基因多態(tài)性與行放化療治療為主的非小細胞肺癌預后相關，攜帶突變純合型(AA)基因型為預后不良因素。
　　3、DUSP6、TOP2A基因多態(tài)性與NSCLC放療中腫瘤退縮率無關聯(lián)。放療中腫瘤退縮率、療前體重下降程度、臨床分期、是否吸煙與行根治性放療治療為主的局部早期非小細胞肺癌預后相關，放療中腫瘤退縮率較慢為預后