五倍子水提取物對體外培養(yǎng)人牙髓細胞生物學特性影響的實驗研究.pdf

1、牙髓疾病多繼發(fā)于齲病，是一個以細菌、細菌代謝產物及炎性因子等多因素參與的復雜過程。如何保護牙髓組織，促進牙髓細胞增殖、分化，發(fā)揮防御修復潛能是活髓保存治療中研究的重點。五倍子中的主要有效成分為鞣酸，具有抗菌、抗自由基、收斂、止血、止痛、減少滲出等多種功效。已有研究證實它能抑制膠原分解，促進牙本質再礦化，抑制釉質脫礦，用鞣酸間接蓋髓能促進修復性牙本質的形成。但是尚未有文獻報道其對直接蓋髓治療的作用。本實驗旨在觀察五倍子水提取物對體外培養(yǎng)人

2、牙髓細胞基本生物學特性的影響，初步探討其作為直接蓋髓材料的可能性。 第一部分人牙髓細胞原代培養(yǎng)方法的比較本實驗分別采用組織塊法、酶消化法及組織塊酶消化法進行人牙髓細胞原代培養(yǎng)。結果顯示：組織塊酶消化法中組織塊解離、貼附和細胞游出狀況均優(yōu)于單純組織塊法和單純酶消化法，成功率較高。提示：采用組織塊酶消化法可提高人牙髓細胞原代培養(yǎng)的成功率。 第二部分五倍子水提取物對人牙髓細胞增殖活性及細胞周期的影響實驗一五倍子水提取物對人牙髓

3、細胞增殖活性的影響本實驗采用MTT 比色分析法，觀察2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml 濃度的五倍子水提取物對人牙髓細胞增殖活性的影響。 結果顯示： 五倍子水提取物濃度＜20μg/ml 時對人牙髓細胞的生長有促進作用，并且該促進作用具有時間依賴性，其中以10μg/ml 濃度作用最為明顯，而40μg/ml濃度可抑制細胞活性，抑制效應見于72h 后，并隨時間的延長抑制作用加強。

4、 實驗二五倍子水提取物對人牙髓細胞周期的影響本實驗采用流式細胞儀檢測技術，觀察不同濃度的五倍子水提取物對人牙髓細胞周期的影響。結果顯示：五倍子水提取物作用后，DNA合成前期(G1期)細胞比例明顯下降，而DNA合成期(S期)細胞比例及細胞增殖指數(shù)上升，其中以10μg/ml的五倍子水提取物作用最為明顯。 第三部分五倍子水提取物對人牙髓細胞堿性磷酸酶及礦化的影響實驗一五倍子水提取物對人牙髓細胞堿性磷酸酶活性的影響本實驗通過檢測2.

5、5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml 濃度的五倍子水提取物作用于人牙髓細胞后對其堿性磷酸酶活性的影響。 結果顯示：2.5μg/ml、5μg/ml 濃度的五倍子水提取物對人牙髓細胞堿性磷酸酶的活性無影響，而濃度≥10μg/ml 時可抑制其活性，其中以40μg/ml 濃度作用最為明顯。 實驗二五倍子水提取物對體外連續(xù)培養(yǎng)人牙髓細胞礦化能力的的影響本實驗采用鈣質染色方法，鏡下觀察2.5μg

6、/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml濃度的五倍子水提取物連續(xù)作用于體外培養(yǎng)的人牙髓細胞，對其礦化能力的影響。結果顯示：五倍子水提取物可以促進體外連續(xù)培養(yǎng)人牙髓細胞的礦化能力。 第四部分五倍子水提取物對人牙髓細胞I 型膠原合成的影響本實驗采用免疫組織化學方法，觀察了5μg/ml、10μg/ml 濃度的五倍子水提取物對人牙髓細胞I 型膠原合成的影響。結果顯示：正常人牙髓細胞中可見I 型膠原的表達，加入五倍子水提取物后