稻粒黑粉菌(Neovossia horrida)的分離鑒定和分子分析.pdf

1、黑粉菌是一類危害農作物的致病真菌，尤其對禾本科植物危害最為廣泛。其特征是在寄主植物的受害部位產生大量由病菌的冬孢子構成的黑色粉狀物。黑粉菌種類繁多，寄主范圍很廣，根據其危害的植物的不同或植物不同部位，可將其病癥命名為小麥散黑穗病、小麥腥黑穗病、小麥稈黑粉病、玉米黑粉病、玉米絲黑穗病、稻粒黑粉病、高粱絲黑穗病、大麥堅黑穗病、甘蔗鞭黑穗病、稻粒黑粉病、高粱長黑穗病等。
　　稻粒黑粉病是由狼尾草腥黑粉菌引起的水稻谷粒發(fā)生病變的一種真菌性

2、病害。水稻在受到侵害后，其穗部病粒少則數粒，多則十數粒至數十粒，病谷米粒全部或部分被破壞，變成青黑色粉末狀物即病原菌的厚垣孢子。該病害分布范圍廣，在亞洲、美洲、非洲等產稻國及我國的大部分水稻種植區(qū)均有分布。自上個70年代中期推廣雜交稻以來，該病害加劇，尤其以雜交稻制種田受害最重，嚴重影響水稻制種的產量和種子品質。
　　本研究從四川、安徽和江西省共采集到12個稻粒黑粉病樣本，通過孢子懸液培養(yǎng)法對這些樣本中的稻粒黑粉菌進行分離，從中分

3、離得到11株稻粒黑粉菌類似菌株，然后采用光學顯微鏡和掃描電鏡鏡對這些菌株進行形態(tài)學觀察，結果表明這些菌株成熟的厚垣孢子深棕褐色至黑色，不透明，壁表密布刺疣。刺疣淡色，頂端尖。厚垣孢子在一定溫度和光照條件下，即可在水中正常萌發(fā)并產生小孢子，不需要其它的特殊營養(yǎng)物質，萌發(fā)時先伸出一條無隔先菌絲，有時有分枝，且長度不一。先菌絲頂端輪生指狀突起，小孢子集生于突起上。小孢子線狀，稍彎曲，無色透明，無分隔。小孢子可芽殖次生小孢子，或直接萌發(fā)生菌絲，

4、次生小孢子線狀或香蕉狀。
　　由于分離得到的候選菌株在形態(tài)非常相似，因此我們僅選取了一株菌株QB-1對其進行形態(tài)學和ITS序列的分子生物學鑒定，結果表明，該菌株為形態(tài)與稻粒黑粉菌的生物學形態(tài)相一致，另外，其ITS序列進化分析也發(fā)現QB-1菌株與NCBI數據庫中已知的Tilletia horrida親緣關系最近，因此，可以確定QB-1即為稻粒黑粉菌。通過對不同溫度、光照和pH值條件下QB-1菌株的生長情況進行觀察，結果發(fā)現，QB-1

5、菌株最適的生長溫度為28℃，最適生長的pH值為5-7，光照的有無對QB-1菌株的生長沒有影響。
　　通過不同方法提取高質量的QB-1菌株的基因組DNA，然后經隨機打斷后構建180bp的pUC18質粒文庫，再利用Illumina Solexa GAⅡx基因組測序儀和SOAPdenovo組裝系統(tǒng)對QB-1菌株基因組序列進行初步測序及序列組裝，最終得到一個由792個Scaffold組成的約19Mb的基因組草圖。該基因組預測編碼基因9，3