尿中甲基馬尿酸的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法研制及應(yīng)用.pdf

1、目的:
　　 二甲苯作為化工原料、溶劑、稀釋劑等廣泛用于工業(yè)生產(chǎn)中,可經(jīng)呼吸道、消化道和皮膚吸收,長(zhǎng)期接觸對(duì)人體產(chǎn)生嚴(yán)重的健康損害。研究表明尿中甲基馬尿酸是二甲苯進(jìn)入人體的特征代謝產(chǎn)物,且尿中甲基馬尿酸濃度與接觸二甲苯濃度高度相關(guān),可作為職業(yè)接觸二甲苯的特異生物標(biāo)志物。美國(guó)ACGIH和德國(guó)DFG都將甲基馬尿酸作為二甲苯接觸者的生物監(jiān)測(cè)指標(biāo),并制定了相關(guān)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn),分別規(guī)定其生物接觸限值為1.5g/g肌酐(BEI)和2.0g/L(B

2、AT)。我國(guó)尚未制定其生物接觸限值,2011年武漢科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院和武漢市職業(yè)病防治院聯(lián)合向國(guó)家衛(wèi)生部職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委員會(huì)申請(qǐng)了“職業(yè)接觸二甲苯尿中甲基馬尿酸生物限值及其檢測(cè)方法研究”項(xiàng)目的研制工作,批準(zhǔn)項(xiàng)目編號(hào)為20110206。原有的甲基馬尿酸國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法分析效果不佳,不能分離甲基馬尿酸同分異構(gòu)體。
　　 本研究探索了一種能較好分離甲基馬尿酸同分異構(gòu)體的方法,并進(jìn)行規(guī)范化研究,為研制我國(guó)職業(yè)接觸二甲苯的生物接觸限值及其檢測(cè)方

3、法提供技術(shù)依據(jù),并將研制的方法應(yīng)用于職業(yè)衛(wèi)生現(xiàn)場(chǎng)和環(huán)境衛(wèi)生現(xiàn)場(chǎng)。
　　 方法:
　　 對(duì)尿樣中的甲基馬尿酸用乙酸乙酯進(jìn)行液-液萃取后,離心,水浴揮干有機(jī)相,定容后,用高效液相色譜法測(cè)定,采用ODS C18色譜柱、以甲醇:0.1％的冰醋酸(33:67,V/V)為流動(dòng)相、流速0.7ml/min、紫外檢測(cè)波長(zhǎng)230nm的色譜條件,采用外標(biāo)法,以保留時(shí)間定性,峰面積定量。并按照我國(guó)職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)制定指南的要求,對(duì)方法的檢出限、準(zhǔn)確

4、度、精密度、樣品存放穩(wěn)定性、抗干擾性等性能指標(biāo)進(jìn)行研究,并將本方法應(yīng)用于職業(yè)衛(wèi)生現(xiàn)場(chǎng)57名工人、以及環(huán)境衛(wèi)生現(xiàn)場(chǎng)231名居民尿中甲基馬尿酸的檢測(cè)。
　　 結(jié)果:
　　 以冰醋酸作為改性劑,選擇甲醇:0.1%冰醋酸(33:67,V/V)為流動(dòng)相、流速0.7ml/min時(shí)3-甲基馬尿酸和4-甲基馬尿酸分離度達(dá)到最高,選擇紫外檢測(cè)波長(zhǎng)230nm時(shí)色譜峰的靈敏度最高。本研制方法在0.025～1.0mg/ml的檢測(cè)范圍內(nèi),有良好線

5、性,2-MHA、3-MHA、4-MHA的相關(guān)系數(shù)分別為0.9996、0.9995、0.9995,檢山限分別為0.47mg/L、0.46mg/L、0.42mg/L,3-MHA和4-MHA的分離度達(dá)到1.44。準(zhǔn)確度用加標(biāo)回收率表示,其范圍為為91.4～101.4%。精密度以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)表示,其范圍為2.0～9.7%。環(huán)境中共存的苯、甲苯等物質(zhì)的代謝產(chǎn)物不干擾尿中甲基馬尿酸的測(cè)定。該方法的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明,在4℃保存時(shí)樣品穩(wěn)定性好,

6、可存放至少兩周。用上述檢測(cè)方法對(duì)職業(yè)衛(wèi)生現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行監(jiān)測(cè),結(jié)果顯示工人班術(shù)尿中甲基馬尿酸濃度(mg/L)與工作場(chǎng)所空氣中二甲苯濃度(TWA)有良好的相關(guān)性(Y=0.0089X-0.0259,R2=0.6292),按照我國(guó)現(xiàn)行的工作場(chǎng)所空氣中二甲苯TWA值推算,當(dāng)工人暴露在濃度為50mg/m3的二甲苯空氣環(huán)境中時(shí),體內(nèi)對(duì)應(yīng)代謝的甲基馬尿酸濃度約為400mg/L,即為二甲苯生物接觸限值。用上述檢測(cè)方法對(duì)環(huán)境衛(wèi)生現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行監(jiān)測(cè),231個(gè)樣本中兩個(gè)化

7、工污染區(qū)和一個(gè)對(duì)照區(qū)居民尿中甲基馬尿酸檢出率分別為12.17%、5.97%,對(duì)照區(qū)檢出率為4%。
　　 結(jié)論:
　　 本研究研制的甲基馬尿酸的高效液相色譜測(cè)定方法能夠能使3-甲基馬尿酸和4-甲基馬尿酸達(dá)到基線分離,靈敏度高,精密度好,回收率高,穩(wěn)定性好,各項(xiàng)方法學(xué)指標(biāo)均符合職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)制定指南第五部分-生物材料中化學(xué)物質(zhì)測(cè)定方法的相關(guān)要求,職業(yè)衛(wèi)生現(xiàn)場(chǎng)和環(huán)境衛(wèi)生現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用結(jié)果均符合實(shí)際情況,因此本方法可用于職業(yè)接觸二甲苯工