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1、背景 苯(benzene)是一種廣泛使用的化學(xué)原料和有機(jī)溶劑,長(zhǎng)期低濃度苯暴露可能損害造血系統(tǒng)甚至導(dǎo)致白血病。利用生物監(jiān)測(cè)可以全面反應(yīng)機(jī)體的實(shí)際接觸情況,為了有效識(shí)別、評(píng)價(jià)苯的職業(yè)暴露水平,美國(guó)、德國(guó)、新加坡等發(fā)達(dá)國(guó)家根據(jù)本國(guó)苯的環(huán)境限值標(biāo)準(zhǔn),已經(jīng)先后研制了苯的生物限值標(biāo)準(zhǔn)。苯的生物代謝產(chǎn)物包括酚類(lèi)、反-反式粘糠酸(t,t-MA)和苯巰基尿酸(S-phenylmercapturic acid,S-PMA)等,S-PMA是苯的特異
2、性代謝產(chǎn)物之一,其作為苯的生物標(biāo)志物受到普遍認(rèn)可。為保護(hù)職業(yè)接苯人群的身體健康,我國(guó)目前修訂的苯的時(shí)間加權(quán)平均容許濃度(PC-TWA)為6mg/m3,根據(jù)環(huán)境暴露限值探討研制符合我國(guó)實(shí)際情況的生物接觸指標(biāo)的檢測(cè)方法及生物接觸限值標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)提到議事日程。 目的: 根據(jù)高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)的基本分析原理和S-PMA理化性質(zhì),探討運(yùn)用HPLC法檢
3、測(cè)尿中S-PMA的尿樣預(yù)處理方法及色譜柱類(lèi)型、柱溫、流動(dòng)相、檢測(cè)波長(zhǎng)等色譜條件的具體選擇,為開(kāi)展苯的職業(yè)暴露生物監(jiān)測(cè)提供方法學(xué)依據(jù);在HPLC法測(cè)定尿中S-PMA的方法學(xué)研制基礎(chǔ)上,通過(guò)對(duì)苯的環(huán)境監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)與尿中S-PMA的測(cè)定濃度進(jìn)行相關(guān)分析,結(jié)合我國(guó)目前苯的環(huán)境暴露限值(PC-TWA=6mg/m3),提出我國(guó)職業(yè)苯暴露生物監(jiān)測(cè)的S-PMA生物接觸限值和應(yīng)用條件。 方法: 選擇非職業(yè)接觸苯及非吸煙的學(xué)生作為本次研究所用尿
4、樣基質(zhì),根據(jù)測(cè)定分析目的在尿樣基質(zhì)中加入相應(yīng)濃度的S-PMA儲(chǔ)備液,運(yùn)用合適的預(yù)處理方法,采用Shim-pack VP-ODS色譜柱、35℃柱溫、205nm紫外檢測(cè)波長(zhǎng)和混合流動(dòng)相等色譜條件對(duì)樣品中的S-PMA進(jìn)行定性定量分析。配制不同濃度S-PMA標(biāo)準(zhǔn)系列,通過(guò)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),求證測(cè)定方法測(cè)定S-PMA的濃度線(xiàn)性范圍;配制三種濃度的S-PMA尿樣,通過(guò)加標(biāo)回收檢測(cè),計(jì)算本方法的回收率;通過(guò)不同時(shí)間測(cè)定平行樣品的S-PMA濃度,計(jì)算本方法
5、的精密度。將尿樣放置于不同溫度環(huán)境中,于放置前、放置后3天、7天和14天對(duì)尿樣中的S-PMA進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算其穩(wěn)定性。 選擇32名職業(yè)接觸苯的工人作為研究對(duì)象,對(duì)研究對(duì)象的環(huán)境暴露水平進(jìn)行個(gè)體采樣,收集研究對(duì)象班末尿樣,通過(guò)HPLC法測(cè)定尿樣中S-PMA濃度,通過(guò)環(huán)境苯濃度與尿液S-PMA濃度相關(guān)回歸分析,結(jié)合我國(guó)目前苯的環(huán)境暴露限值(6mg/m3)計(jì)算符合我國(guó)情況的S-PMA生物接觸限值。 結(jié)果: S-PMA的保
6、留時(shí)間在30.5min左右,所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)在S-PMA的質(zhì)量濃度為40~200μg/L時(shí)線(xiàn)性關(guān)系良好(r=0.9997),檢測(cè)限40μg/L,加標(biāo)回收率為92.64%~103.66%,日內(nèi)與日間精密度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.4%~14.5%和3.8%~9.2%。將尿樣放入冰箱前當(dāng)天、放入后第3天、第7天及第14天,計(jì)算4℃及-20℃條件下保存的尿樣S-PMA的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為6.60%和2.40%。 32名職業(yè)接苯工人空氣樣品個(gè)體采
7、樣檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示,空氣苯的平均濃度為(41.16±34.74)mg/m3。32名工人尿中的S-PMA濃度為(464.04±400.79)μg/g Cr;將班末尿S-PMA與個(gè)體接苯水平建立直線(xiàn)回歸方程為:Y(μg/g Cr)=10.134X(mg/m3)+47.104,(n=32,r=0.7712,P<0.01)。結(jié)合我國(guó)目前苯的環(huán)境暴露限值為6mg/m3,計(jì)算的S-PMA生物接觸限值為107.8μg/g Cr。 結(jié)論:
8、1.HPLC法測(cè)定尿中S-PMA的色譜條件為:采用C18柱進(jìn)行分離,以乙腈作為流動(dòng)相A,乙腈-甲醇-三乙胺為流動(dòng)相B進(jìn)行梯度洗脫,流速2ml/min,柱溫35℃,紫外檢測(cè)波長(zhǎng)205nm; 2.HPLC法測(cè)定尿中S-PMA的色譜行為、最低檢測(cè)限、檢測(cè)線(xiàn)性范圍、測(cè)定的準(zhǔn)確度、精密度等能滿(mǎn)足職業(yè)苯暴露生物限值測(cè)定基本要求; 3.HPLC法測(cè)定尿中的S-PMA,其尿樣保存在4℃及-20℃條件下的時(shí)間建議在14天左右; 4
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