食品生物胺高效液相色譜分析技術(shù)的系統(tǒng)研究.pdf

1、生物胺是微生物氨基酸脫羧酶作用于食品中游離氨基酸的產(chǎn)物。它們在多種食品中均有分布，尤其是發(fā)酵和受微生物污染的食品。由于生物胺存在潛在的毒性，并且同時可作為食品微生物質(zhì)量的重要標(biāo)志物，生物胺分析成為食品污染物及品質(zhì)分析的重要和常規(guī)組成部分。本研究重點對食品生物胺的高效液相色譜(HPLC)分析技術(shù)進(jìn)行了系統(tǒng)研究，主要研究結(jié)果如下：
　　1.采用苯甲酰氯衍生分析法調(diào)查了半干和半甜型紹興黃酒樣品（n=39）的生物胺組成和含量。結(jié)果表明其主

2、要生物胺是5-羥色胺、腐胺、酪胺、尸胺和組胺（平均含量由高至低）;生物胺總量變化范圍為29.3～260 mg/L，平均為115mg/L。統(tǒng)計分析表明:(1)某些生物胺含量之間存在較強(qiáng)的皮爾森相關(guān)性，表明它們的產(chǎn)生可能受共同因素的相似影響;(2)半甜型黃酒的5-羥色胺含量明顯高于半干型黃酒，有可能是因為5-羥色胺主要來自于原料糯米;(3)某些企業(yè)產(chǎn)品中的生物胺含量更高，可能與原料和/或釀造工藝有關(guān)。
　　2.改進(jìn)了生物胺的苯甲酰氯衍

3、生分析法:(1)通過使用漩渦振蕩大幅提高了低水溶性的苯甲酰氯與生物胺之間的反應(yīng)速率，反應(yīng)時間從現(xiàn)有方法的15～45min縮短至僅需2 min，使得其可以成為速度最快的生物胺衍生方法之一;(2)漩渦振蕩反應(yīng)可顯著提高部分生物胺（包括組胺和酪胺）的衍生產(chǎn)率，從而改善了方法的靈敏度。但同時應(yīng)注意控制氫氧化鈉用量，氫氧化鈉過多將消耗苯甲酰氯，導(dǎo)致部分生物胺衍生產(chǎn)率降低;(3)反應(yīng)后補(bǔ)充氫氧化鈉和適量乙腈并進(jìn)行漩渦振蕩(1 min)能夠快速有效地

4、去除多余和有害的苯甲酰氯，避免苯甲酸、苯甲酸酐和苯甲酸甲酯等已知副產(chǎn)物的干擾，從而改善色譜分離以及定性定量。應(yīng)用改進(jìn)的衍生分析方法檢測了啤酒樣品中的十種生物胺，結(jié)果表明方法的可靠性良好。
　　3.研究了毒性相對較高的六種芳香或雜環(huán)族生物胺的離散鹽色譜分析技術(shù)。在反相色譜模式下，生物胺離子存在保留差（甚至無保留）和過載性質(zhì)的峰拖尾兩大問題。使用離散鹽KPF6能夠同時解決以上兩個問題。但過量KPF6能導(dǎo)致生物胺離子保留略微下降。生物胺

5、離子的對數(shù)保留(log k)與流動相中乙腈濃度（ψ）的關(guān)系并不總是簡單的線性關(guān)系。尤其是組胺展示了反常的保留行為（ψ增加時，組胺保留先增加后降低）。針對三種不同類型食品（食醋、鮐魚和白酒）的分析需求，優(yōu)化了一套色譜分離條件（使用乙腈-水流動相體系，水相中含50mmol/L KPF6和10 mmol/L磷酸）。在該條件下，六種生物胺具有滿意的色譜保留、峰形、分離柱效、以及與雜質(zhì)的分離度。方法檢出限為0.06～0.15μg/mL，與其它使用

6、衍生化處理的HPLC-UV方法相似或者更低。
　　4.研究了生物胺的高溫液相色譜分析技術(shù)。當(dāng)使用適度高溫（如≤80℃）時，除加裝適當(dāng)長度（如0.5～1 m）的不銹鋼預(yù)熱管路外，無須對HPLC設(shè)備進(jìn)行其它主要改造;生物胺的苯甲酰氯衍生物在耐熱的Zorbax StableBond C8柱內(nèi)具有合理的熱穩(wěn)定性;使用色譜模擬軟件DryLab可以快速和全面地尋找到潛在最佳溫度和梯度條件。本研究對紅酒樣品的分離優(yōu)化表明，溫度是值得重視的選擇性

7、調(diào)節(jié)因子，而方便利用溫度選擇性構(gòu)成高溫液相色譜技術(shù)的一大獨特優(yōu)勢;使用高溫增加了流動相流速優(yōu)化的復(fù)雜性:一是更高的流速需要使用更長的預(yù)熱管路，以保證流動相預(yù)熱效果良好及柱效不發(fā)生明顯降低。二是為了保持保留因子k和選擇性α不變，在提高流速的同時有必要適當(dāng)調(diào)整柱溫箱溫度;優(yōu)化的高溫液相色譜方法可使用3 mL/min的高流速（系統(tǒng)壓力降＜200 bar），在6.5 min內(nèi)可以實現(xiàn)Rs=1.83（紅酒樣品中8種生物胺與8個雜質(zhì)峰）的高分離度;