逍遙散抗抑郁有效部位配伍的譜效關(guān)系研究.pdf

1、選題依據(jù):抑郁癥是一種常見的精神疾病，隨著人們生活節(jié)奏的加快，社會(huì)壓力的增大，人們的精神壓力也日益增加，導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，其危害已越來越引起醫(yī)藥衛(wèi)生界的高度重視。逍遙散具有確切的抗抑郁作用，且有副作用低、復(fù)發(fā)率低等優(yōu)勢(shì)，因而可以從逍遙散中開發(fā)理想的抗抑郁新藥，但是對(duì)逍遙散抗抑郁的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。眾所周知，中藥復(fù)方具有多組分協(xié)同作用的特點(diǎn)，由于中藥復(fù)雜性所引起的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不明確、純度較低、質(zhì)量不穩(wěn)定等諸

2、多問題，一直困擾著中藥的應(yīng)用與現(xiàn)代化發(fā)展。因此，闡明逍遙散抗抑郁的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，可以為該方的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)，同時(shí)為從中藥中研發(fā)療效更佳的抗抑郁新藥奠定基礎(chǔ)。“中藥譜效關(guān)系”是近幾年由中醫(yī)藥研究者提出的中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究新思路，其目的就是通過化學(xué)指紋圖譜與藥效之間的相互關(guān)系揭示中藥所含的化學(xué)成分與藥效之間的相互關(guān)系，從而闡明與藥效相關(guān)的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。本課題組對(duì)逍遙散做了大量的前期研究工作，已經(jīng)從逍遙散中篩選出了具有明顯抗抑郁活性的

3、有效部位，為逍遙散的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，然而，這些有效部位中哪些化學(xué)成分與藥效更加相關(guān)目前還不清楚。
　　目的:基于中醫(yī)整體觀和中藥譜效關(guān)系研究思路，將課題組前期篩選尋找到的有效部位經(jīng)配伍優(yōu)化設(shè)計(jì)成若干組份，探索逍遙散抗抑郁有效部位配伍的譜效關(guān)系，尋找與治療抑郁癥有關(guān)的化學(xué)成分，初步闡明逍遙散抗抑郁的藥效化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　方法:采用正交設(shè)計(jì)，研究逍遙散抗抑郁有效部位X7、X6、X5配伍對(duì)行為絕望模型小鼠行為學(xué)

4、的影響，考察各部位對(duì)藥效的影響大小，并進(jìn)一步考察其配伍對(duì)小鼠睡眠時(shí)間的影響;設(shè)計(jì)一系列與原有有效部位X7、 X6提取工藝相似的工藝，采用行為絕望模型及HPLC-UV檢測(cè)手段對(duì)有效部位的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化篩選;采用HPLC-UV建立逍遙散抗抑郁有效部位X7、X6的指紋圖譜，并考察其工藝的穩(wěn)定性;對(duì)X7、X6兩個(gè)有效部位繼續(xù)進(jìn)行配伍研究，運(yùn)用行為學(xué)、生化指標(biāo)等多種藥效指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)逍遙散抗抑郁有效部位配伍組份的抗抑郁藥理作用，考察單獨(dú)的有效部位

5、X7、X6及其配伍后的藥效差異，并篩選最佳配伍組份;基于多源譜效關(guān)系研究思路，應(yīng)用GC-MS、UPLC等色譜分析方法對(duì)配伍組份進(jìn)行“譜”分析，結(jié)合各配伍組圖譜分析結(jié)果和藥效的關(guān)系，應(yīng)用多種關(guān)聯(lián)分析法（主成分分析、相關(guān)分析、多元回歸分析等），建立譜效關(guān)系，客觀準(zhǔn)確尋找與治療抑郁癥有關(guān)的特征峰，并對(duì)從圖譜中確定的對(duì)藥效貢獻(xiàn)大的化學(xué)成分進(jìn)行單味藥材的歸屬和定性識(shí)別。
　　結(jié)果:1.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示逍遙散抗抑郁有效部位X7、X6對(duì)抗抑郁藥效具

6、有顯著性影響，部位X5影響無顯著性意義，即部位X5對(duì)抗抑郁藥效貢獻(xiàn)較小，予以剔除，從而簡(jiǎn)化了有效部位的配伍規(guī)模。研究結(jié)果也表明逍遙散抗抑郁有效部位配伍組份能明顯縮短閾劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時(shí)間，且其睡眠作用機(jī)制可能與文拉法辛相似。
　　2.篩選結(jié)果顯示硅藻土石油醚工藝所得提取物與原有提取工藝得到的有效部位化學(xué)成分相同且抗抑郁活性相當(dāng)。鑒于硅藻土石油醚工藝其工藝可控性及操作可行性良好，易形成操作規(guī)程，因此用硅藻土石油醚工藝代替原

7、有提取工藝。在證明其工藝穩(wěn)定可靠的同時(shí)，本研究采用HPLC-UV建立了逍遙散抗抑郁有效部位X7、X6的指紋圖譜。
　　3.運(yùn)用行為學(xué)、生化指標(biāo)等多種藥效指標(biāo)成功評(píng)價(jià)了各配伍組份的抗抑郁藥效。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明不同配伍組份由于所含化學(xué)成分含量差異，其抗抑郁藥效明顯不同，有效部位X6可增強(qiáng)有效部位X7的抗抑郁效果，顯示出一定的協(xié)同抗抑郁效果，佐證了中藥多組分，多靶點(diǎn)作用的合理性，且兩有效部位配伍后形成的配伍組份優(yōu)于單獨(dú)的有效部位。此外，本研

8、究篩選出了最佳的抗抑郁配伍組份，即當(dāng)有效部位按生藥量計(jì)，X7、X6均為92.6 g/kg時(shí)，抗抑郁作用最佳，研究結(jié)果顯示其抗抑郁藥效接近甚至在一些指標(biāo)上優(yōu)于陽性藥文拉法辛。
　　4.基于多源譜效關(guān)系研究思路，應(yīng)用GC-MS、UPLC等色譜分析方法對(duì)由于化學(xué)成分含量差異引起藥效差異的逍遙散抗抑郁有效部位配伍組份進(jìn)行了“譜”分析。通過對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)的考察表明，本研究建立的分析方法均能達(dá)到指紋圖譜分析技術(shù)要求，所獲得的GC-MS、UPLC指

9、紋圖譜能夠全面、有效地反應(yīng)有效部位配伍組份的的內(nèi)在主要化學(xué)成分。與此同時(shí)，對(duì)指紋圖譜中的特征峰進(jìn)行了峰面積的測(cè)定。
　　5.結(jié)合各配伍組份圖譜分析結(jié)果和藥效的關(guān)系，應(yīng)用相關(guān)分析、回歸分析等多種關(guān)聯(lián)分析法，相互驗(yàn)證，建立譜效關(guān)系，尋找并指認(rèn)出了一些與治療抑郁癥有關(guān)的化學(xué)成分:在基于GC-MS的譜效關(guān)系研究中，共尋找到9個(gè)活性成分，其中指認(rèn)出5個(gè)（蒼術(shù)酮、藁本內(nèi)酯、棕櫚酸、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ），未知化合物4個(gè);在基于UPLC的譜效

10、關(guān)系研究中，共尋找到11個(gè)活性成分，其中指認(rèn)出3個(gè)（歐前胡素、藁本內(nèi)酯、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ），未知化合物8個(gè)。并對(duì)這些化學(xué)成分進(jìn)行了單味藥材的歸屬。分析結(jié)果表明有效成分主要來自于柴胡、當(dāng)歸、白術(shù)三味藥材，進(jìn)一步證明了該經(jīng)典名方中柴胡、當(dāng)歸的君藥地位以及白術(shù)的臣藥地位。部分化學(xué)成分的抗抑郁活性已被文獻(xiàn)所證實(shí)，一定程度上證明了本研究所采用的譜效分析方法的客觀性與準(zhǔn)確性。
　　結(jié)論:1.成功評(píng)價(jià)了由于化學(xué)成分含量差異引起藥效差異的逍遙散抗抑郁有

11、效部位配伍組份。通過考察發(fā)現(xiàn)有效部位配伍后形成的配伍組份優(yōu)于單獨(dú)的有效部位X7、X6，并篩選出了最佳的抗抑郁配伍組份，即當(dāng)有效部位按生藥量計(jì)，X7、X6均為92.6 g/kg時(shí)，抗抑郁作用最佳。本研究為進(jìn)一步基于有效部位配伍的譜效關(guān)系研究奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)，本研究結(jié)果為新型抗抑郁組分中藥的研發(fā)提供了一定的參考價(jià)值。
　　2.基于多源譜效關(guān)系研究思路，運(yùn)用GC-MS、UPLC等色譜分析方法及多種關(guān)聯(lián)分析法，建立譜效關(guān)系，成功尋找到一組