兒童激素耐藥型與激素敏感型腎病綜合征尿蛋白組學(xué)的初步研究.pdf

1、目的:篩選和鑒定激素耐藥型原發(fā)性腎病綜合征(SRNS)與激素敏感型原發(fā)性腎病綜合征(SSNS)尿液中差異表達(dá)的蛋白質(zhì),尋找可能與原發(fā)性腎病綜合征激素耐藥、激素敏感及疾病預(yù)后相關(guān)的蛋白質(zhì)。
　　方法:研究對象共20例,其中,治療前和治療后SSNS各5例、SRNS 5例、正常對照組5例,提取尿液全蛋白,采用固相pH梯度雙向凝膠電泳(2-DE)方法,建立尿液全蛋白凝膠圖譜;應(yīng)用投射掃描儀對銀染色后的凝膠圖進(jìn)行掃描,使用Image Mas

2、ter 2D V3.01分析軟件分析和識別差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn),利用基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜(matrix-assisted laser desorption/ionization time offlight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)得到差異蛋白質(zhì)點(diǎn)的肽質(zhì)量指紋圖譜(PMF),通過Mascot軟件進(jìn)入NCBI數(shù)據(jù)庫,鑒定出差異表達(dá)蛋白質(zhì)。
　　結(jié)果:正常對照組、SSNS治療前組、SSNS

3、治療后組和SRNS組尿液2-DE凝膠的蛋白質(zhì)平均檢測點(diǎn)分別為105±7個、204±5個、55±5個和206±8個。SRNS組與SSNS治療前組尿液2-DE凝膠比較篩選出差異蛋白質(zhì)點(diǎn)66個,其中,僅存在于SRNS組的蛋白質(zhì)點(diǎn)24個、僅存在于SSNS治療前組的蛋白質(zhì)點(diǎn)27個;SSNS治療后組與正常對照組尿液2-DE凝膠比較篩選出差異蛋白質(zhì)點(diǎn)75個,其中,僅在SSNS治療后組出現(xiàn)的蛋白質(zhì)點(diǎn)11個。本實(shí)驗(yàn)對其中18個差異明顯的蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行了MA

4、LDI-TOF-MS分析,鑒定出9類差異表達(dá)的蛋白質(zhì):①白蛋白結(jié)構(gòu)3區(qū)與一個針對Bcl-xL和Bcl-2的抗凋亡配體的復(fù)合物;②白蛋白前體;③Igκ鏈NIG26前體;④α1-抗胰蛋白酶;⑤與Vegfα1-抗胰蛋白酶形成復(fù)合物的噬菌體來源的Fab片段;⑥轉(zhuǎn)鐵蛋白;⑦一個具有廣泛的中和抗艾滋病毒-1抗體晶體結(jié)構(gòu)與模擬肽的復(fù)合體;⑧甘露聚糖結(jié)合凝集素-相關(guān)蛋白19(Map19);⑨帶異類電荷的糖蛋白復(fù)合體(protein HC)。