菝葜中醛糖還原酶抑制成分的篩選、分離及體內(nèi)活性研究.pdf

1、菝葜是一種被廣泛應(yīng)用的傳統(tǒng)中藥，它能顯著降低實(shí)驗(yàn)性糖尿病小鼠的血糖，但對(duì)菝葜降血糖有效成分及其體內(nèi)外酶學(xué)性質(zhì)研究尚未有人報(bào)道。本課題通過建立的中藥雙酶篩選模型，首次發(fā)現(xiàn)中藥菝葜對(duì)醛糖還原酶和α-葡萄糖苷酶都具有強(qiáng)抑制作用，顯示了其作為具有降血糖作用的糖尿病并發(fā)癥藥物的潛在開發(fā)前景。 本文以醛糖還原酶和α-葡萄糖苷酶雙酶抑制活性為導(dǎo)向從中藥菝葜中分離和純化了具有顯著抑制活性的兩種物質(zhì)——A和B。研究了這兩個(gè)物質(zhì)的酶學(xué)性質(zhì)、體內(nèi)降血

2、糖活性及對(duì)肝糖原含量和體內(nèi)酶活的影響。 主要分離工藝路線為：乙醇浸提得浸膏、再依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，其中乙酸乙酯相經(jīng)過硅膠柱層析進(jìn)一步純化得到A、B兩種活性組分，得率分別為0.124％和0.096％。經(jīng)化學(xué)方法定性分析，初步定性為皂甙類(A)和黃酮類 (B)，HPLC檢測(cè)顯示A純度為80％，B達(dá)到99.5％以上。酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)表明：物質(zhì)A對(duì)醛糖還原酶為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制，比活力為44.2U/mg，物質(zhì)B對(duì)醛糖還原酶為

3、競(jìng)爭(zhēng)性抑制，比活力為225U/mg。物質(zhì)A對(duì)α-葡萄糖苷酶比活力為32.5U/mg，抑制活性較弱，物質(zhì)B對(duì)α-葡萄糖苷酶為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制，比活力為195.2U/mg，物質(zhì)B對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制活性是拜糖蘋的3倍。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，每天按120mg/kg給藥，連續(xù)給藥八天，物質(zhì)A對(duì)正常小鼠和四氧嘧啶糖尿病小鼠都有明顯的降血糖作用，同樣實(shí)驗(yàn)顯示物質(zhì)B也有類似的降血糖效果，但A的降糖效果好與B，接近市售格華止和拜糖蘋。物質(zhì)A和物質(zhì)B都能