利用安全選擇標(biāo)記系統(tǒng)進(jìn)行楓香耐鹽轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、土壤鹽漬化是一個世界性問題。在鹽堿地上植樹造林不僅可以改善生態(tài)環(huán)境，而且可以帶來一定的經(jīng)濟(jì)效益，因此，耐鹽樹種的選育是林木育種工作者的當(dāng)務(wù)之急。基因工程技術(shù)打破了常規(guī)育種的局限性，可直接將外源耐鹽基因?qū)肓帜緩亩@得耐鹽新品種，加速育種進(jìn)程。但轉(zhuǎn)基因植株中選擇標(biāo)記基因安全性已引發(fā)了廣泛的爭議。本研究運(yùn)用了雙效安全的選擇系統(tǒng)對楓香進(jìn)行耐鹽轉(zhuǎn)化，主要取得了以下三個方面的實驗結(jié)果： (1)構(gòu)建了雙T-DNA表達(dá)載體pCAMBI1301

2、-NHX。 本實驗成功構(gòu)建了含manA和AtNHX1基因的雙T-DNA表達(dá)載體pCAMBI1301-NHX。這是首次將耐鹽基因和甘露糖安全選擇標(biāo)記基因構(gòu)建到同一個植物表達(dá)載體上，并且這兩個基因分別位于載體的兩個獨(dú)立的T-DNA區(qū)，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)植物轉(zhuǎn)化該表達(dá)載體，可以獲得含安全選擇標(biāo)記基因的T<,0>代轉(zhuǎn)化植株，選擇標(biāo)記基因和目的基因可以在轉(zhuǎn)基因植株自交后代中分離，期望在T<,1>代篩選到只含有AtNHX1基因的MFTP。

3、 (2) 首次建立了楓香甘露糖篩選體系。 通過甘露糖敏感性測驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨甘露糖濃度增加，楓香不定芽分化率降低，說明楓香可以利用甘露糖對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行篩選；受體葉片與農(nóng)桿菌共培養(yǎng)后，在含不同濃度的甘露糖和蔗糖的分化培養(yǎng)基上進(jìn)行分化，不定芽經(jīng)PCR檢測結(jié)果顯示，在含15g/l甘露糖和10g/l蔗糖的培養(yǎng)基上分化的不定芽陽性率為82±15.7％，每個分化葉片平均可誘導(dǎo)出7.7±3.8 個陽性芽，轉(zhuǎn)化效率最高，因此確定該濃度組合為楓