蘋果花藥培養(yǎng)胚狀體形成的細胞學觀察.pdf

1、花藥培養(yǎng)是指采集小孢子細胞發(fā)育到了一定階段的花藥，使其能在人工合成的培養(yǎng)基中存活生長，并且改變花粉發(fā)育途徑，使其不形成配子體，而像全能細胞一樣分裂、分化，由單個的小孢子細胞發(fā)育并且長成完整植株的技術?；ㄋ幣囵B(yǎng)是人工單倍體育種的重要手段，因其可操作應強，誘導率高等優(yōu)點被廣泛應用于各植物育種方面的研究。蘋果單倍體育種的主要手段也是花藥培養(yǎng)，蘋果花藥培養(yǎng)首先得到胚狀體，再誘導胚狀體生成幼苗，幼苗經(jīng)過培養(yǎng)長成單倍體的植株。而胚狀體的獲得作為完整

2、的技術鏈中的第一步，也是最關鍵的一步。本研究的主要目的是從細胞水平探明蘋果花藥培養(yǎng)誘導形成胚狀體的細胞學發(fā)育過程。首先對丹霞、嘎啦花藥進行培養(yǎng)，并且采集培養(yǎng)過程中不同培養(yǎng)天數(shù)的花藥，制作石蠟切片進行觀察，對觀察到的不同發(fā)育階段的細胞數(shù)量進行統(tǒng)計和數(shù)據(jù)分析，最后對花藥的胚狀體和愈傷組織誘導率進行統(tǒng)計計算。得到的結果如下:
　　1、蘋果花藥制片技術優(yōu)化:在傳統(tǒng)的制作石蠟切片的基礎上對脫水梯度、時間和染色時間進行了改良，使其適用于蘋果花

3、藥的細胞學觀察。通過實驗獲得一套適合蘋果花藥的完整石蠟切片制片技術流程，即石蠟切片的脫水環(huán)節(jié)改為50％、60％、70％、85％、95％、100％的梯度乙醇，以保證脫水后的花藥不會皺縮變形，保持飽滿狀態(tài);染色采用埃里希氏蘇木精染液染色15min，以保證切片染色良好。
　　2、蘋果小孢子細胞發(fā)育過程觀察:通過對石蠟切片進行細胞學觀察，并且與合子胚發(fā)育過程相對比，了解到蘋果花藥培養(yǎng)胚狀體發(fā)育的特點，即花粉胚性細胞發(fā)育時，其基細胞與頂細胞

4、發(fā)育無先后之分。
　　3、通過鏡檢，找到了蘋果花粉細胞從單個細胞，到多細胞團，再到球形胚，心形胚的細胞發(fā)育過程，且兩品種細胞發(fā)育過程相同。
　　4、通過比較不同品種胚發(fā)生過程中細胞的狀態(tài)，觀察嘎啦與丹霞的花粉細胞發(fā)育狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)嘎啦在花藥培養(yǎng)過程中分裂的細胞所占比例較少，而愈傷組織細胞很多，丹霞在花藥培養(yǎng)過程中分裂的細胞所占比例較多，而愈傷組織細胞較少，并且在5d-60d的花藥培養(yǎng)過程中，嘎啦的愈傷組織細胞分布與丹霞的分裂細胞

5、分布相似，都是在15d-17d之間細胞分裂分化活躍。但因兩個品種基因型不同，樹體本身營養(yǎng)條件不同，故兩者的細胞發(fā)育差異性需后期深入研究。
　　5、通過對比不同培養(yǎng)天數(shù)下細胞狀態(tài)，將胚狀體發(fā)生過程中的所有細胞狀態(tài)，即正常細胞，分裂細胞，愈傷組織細胞以及死亡的細胞，統(tǒng)計細胞數(shù)量進行數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn):正常細胞在整個胚發(fā)生過程中所占比例平均，沒有明顯變化;培養(yǎng)5d-17d是細胞分裂的主要時期，15d-17d是細胞分裂最旺盛的時間段;丹霞品種愈