高活性CIKs細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)室制備及其影響因素的研究.pdf

1、目的：探討培養(yǎng)時(shí)間、取材來源、保存方式及培養(yǎng)體系成分對CIKs細(xì)胞體外細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)、免疫表型及腫瘤殺傷活性的影響，為腫瘤治療合理科學(xué)使用CIKs細(xì)胞回輸提供實(shí)驗(yàn)支持。方法：(1)原代培養(yǎng)肺癌、乳腺癌細(xì)胞作為靶細(xì)胞備用。(2)健康成人外周血分離單個(gè)核細(xì)胞，分別以常規(guī)CIKs誘導(dǎo)體系、加入腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液體系和加入DC-CIKs培養(yǎng)上清液體系進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。特定時(shí)間點(diǎn)檢測細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)、相關(guān)免疫表型及腫瘤殺傷活性。(3)健康足月產(chǎn)婦胎兒臍血分

2、離單個(gè)核細(xì)胞以常規(guī)誘導(dǎo)體系和加入腫瘤細(xì)胞上清液體系進(jìn)行培養(yǎng)，按(2)中時(shí)間及方法進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測。(4)冷凍保存兩種單個(gè)核細(xì)胞，并在第7、14、21天復(fù)蘇，常規(guī)誘導(dǎo)體系培養(yǎng)后測定相關(guān)指標(biāo)。(5)常規(guī)體系培養(yǎng)14天的CIKs冷凍復(fù)蘇后進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測。 結(jié)果：(1)常規(guī)培養(yǎng)CIKs細(xì)胞培養(yǎng)第14天對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生明顯殺傷作用，21天殺傷活性進(jìn)入高峰期，35天呈下降趨勢；(2)臍血CIKs培養(yǎng)前兩周CD3+CD56+細(xì)胞比例，腫瘤殺傷

3、活性高于外周血組，21至28天時(shí)兩者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，35天臍血組無下降趨勢；(3)加入DC-CIK細(xì)胞培養(yǎng)上清液的健康成人來源CIKs細(xì)胞CD3+CD56+細(xì)胞比例、腫瘤殺傷活性高于常規(guī)培養(yǎng)的同來源CIKs；(4)培養(yǎng)時(shí)加入腫瘤培養(yǎng)上清液的CIKs細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)，CD3+CD56+細(xì)胞比例，腫瘤細(xì)胞殺傷活性下降；(5)3周內(nèi)凍存單個(gè)核細(xì)胞擴(kuò)增的CIKs與常規(guī)培養(yǎng)CIKs各項(xiàng)特征無明顯差別；培養(yǎng)14天的CIKs凍存后，隨凍存時(shí)間延長腫瘤殺傷活

4、性下降。結(jié)論：1、CIKs細(xì)胞對于肺癌、乳腺癌細(xì)胞在體外均具有殺傷活性，兩者間無明顯差別，一定時(shí)間范圍內(nèi)，延長培養(yǎng)時(shí)間可提高CD3+CD56+細(xì)胞比例和CIKs腫瘤殺傷活性；2、臍血來源CIKs在體外腫瘤殺傷活性穩(wěn)定，腫瘤殺傷活性高峰期持續(xù)時(shí)間長。3、DC-CIKs細(xì)胞培養(yǎng)上清液為條件培養(yǎng)基可提高外周血來源CIKs的CD3+CD56+細(xì)胞比例及其腫瘤殺傷活性。4、腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液在培養(yǎng)過程中顯著降低CIKs的擴(kuò)增倍數(shù)和腫瘤殺傷活性。5