某地區(qū)獻血員及白血病患者中隱匿性乙型肝炎病毒感染的分子流行病學調查.pdf

1、目的:了解某地區(qū)獻血員及HBsAg陰性的白血病患者中隱匿性HBV感染的檢出率,并探討其與研究對象年齡、性別、生化學檢測結果以及乙型肝炎病毒標志物之間的關系,同時從S基因變異角度探討隱匿性HBV感染可能的分子機制。
　　方法:①病例選擇和標本收集:收集2010年6月~2010年9月間經某地區(qū)血站篩查HBsAg陰性的合格獻血員血漿594份。另收集2010年9月~2010年10月間某地區(qū)三甲醫(yī)院檢驗科檢驗結果為HBsAg、抗-HBc定量

2、檢測雙陽性且HBV DNA陽性的HBV感染者做對照。87份HBsAg陰性的白血病患者血清標本均來自2010年8月至2010年12月間在某地區(qū)三甲醫(yī)院血液科確診為白血病的患者(包括急性及慢性白血病患者)。②HBV DNA提取:采用經典蛋白酶K消化-酚/氯仿法。③巢式PCR法檢測HBV DNA:參考國內外文獻及HBV參照序列,在HBV基因組S、C、X區(qū)分別設計一對巢式引物。巢式PCR擴增,當任兩個區(qū)同時陽性者定義為隱匿性HBV感染者。④雅培

3、Architect I2000R電化學發(fā)光儀定量檢測隱匿性HBV感染者的HBV血清學標志物,對隱匿性HBV感染者與非感染者進行性別、年齡、生化學檢測結果以及HBV血清標志物等的比較。⑤擴增HBV DNA陽性者小S區(qū)測序:根據(jù)HBV參照序列,在S區(qū)設計引物,對隱匿性HBV感染者以及11例HBsAg和抗-HBc雙陽性的HBV感染者進行擴增測序,并進行基因型、HBsAg“α”決定簇突變分析,發(fā)現(xiàn)可能和隱匿性HBV感染有關的變異位點。
　

4、　結果:一、獻血員:①在594例獻血員中有15例為隱匿性HBV感染,隱匿性HBV感染的發(fā)生率為2.5％(15/594)。未發(fā)現(xiàn)HBV血清學標志物檢測結果與隱匿性HBV感染有相關性。②將獻血員中隱匿性HBV感染者和陽性對照ⅠS區(qū)的測序序列與HBV標準序列相比較,結果共檢測到2種基因型(HBV/B, HBV/C),其中HBV/B基因型占優(yōu)勢,10例隱匿性HBV感染者HBV基因型分別為HBV/B(9例),HBV/C(1例),而11例陽性對照Ⅰ

5、HBV基因型分別為HBV/B(10例),HBV/C(1例)。隱匿性HBV感染者和陽性對照Ⅰ相比較,兩者的基因型分布并無統(tǒng)計學意義。③獻血員中,15例隱匿性HBV感染者中共10人有S區(qū)測序結果,其HBV DNA均有不同程度的變異,其中共有3例在“a”決定簇內出現(xiàn)氨基酸突變,分別為I126T(1例)、T140I(2例)。與隱匿性HBV感染者相比,陽性對照Ⅰ在“a”決定簇內僅出現(xiàn)了1例T131N變異。
　　二、白血病:①在87例HBsA

6、g陰性的白血病中,隱匿性感染者有15例,隱匿性 HBV感染的檢出率為17.2%(15/87)。實驗組的年齡、性別分布、生化學檢測結果等與對照組相比,差別無統(tǒng)計學意義。②在白血病患者中隱匿性HBV感染的抗-HBc陽性的檢出率(46%,7/15)顯著高于對照組中抗-HBc陽性檢出率(9.7%,7/72)(χ2=12.548, P﹤0.001),即在白血病患者中抗-HBc陽性與否,與隱匿性感染有顯著相關性。③白血病患者中隱匿性 HBV感染者共

7、檢測到2種基因型(HBV/B, HBV/C),其中HBV/C基因型占優(yōu)勢,11例隱匿性HBV感染者HBV基因型分別為HBV/C(10例),HBV/B(1例),與獻血員中隱匿性HBV感染者的測序結果差別較大。④白血病中,15例隱匿性HBV感染者中共11人有S區(qū)測序結果,其中1例隱匿性HBV感染者出現(xiàn)了插入突變,另2例提前形成終止密碼,形成縮短的氨基酸序列,并有6例有氨基酸突變存在。在不同基因型的隱匿性HBV感染者中,在MHR區(qū)存在變異的5

8、例基因型C病毒株均發(fā)生了I126T變異,而唯一1例基因型B病毒株發(fā)生的是Q129R、D144E、S155Y聯(lián)合變異。
　　結論:①在本地區(qū)獻血員及HBsAg陰性的白血病患者中隱匿性HBV感染的檢出率分別為2.5%和17.2%。②在白血病患者中,抗-HBc陽性與隱匿性HBV感染有明顯的相關性。③白血病患者中隱匿性HBV感染者與本地區(qū)慢性HBV感染者基因型有顯著不同。④HBV S區(qū)基因變異尤其是HBsAg“α”決定簇存在氨基酸改變可能