ADAM10缺失對(duì)CaMKⅡα基因表達(dá),膠質(zhì)細(xì)胞增殖及突觸可塑性的影響.pdf

1、目的：ADAM10作為ADAM家族的成員之一，是一個(gè)非常關(guān)鍵的調(diào)節(jié)性去整合素和金屬蛋白酶，在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中發(fā)揮著極其重要的調(diào)節(jié)作用。研究表明ADAM10常規(guī)基因敲除小鼠在胚胎發(fā)育早期死亡，阻礙了在成體動(dòng)物中進(jìn)一步研究ADAM10基因缺失對(duì)于CaMKⅡα的表達(dá)，膠質(zhì)細(xì)胞增殖及突觸可塑性的影響。為了解決此問題,本研究通過利用CaMKⅡα-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠與ADAM10loxP/loxP轉(zhuǎn)基因小鼠雜交，獲得了成年神經(jīng)細(xì)胞特異性ADAM10基因

2、敲除小鼠（cKO），有利于在成年小鼠中探究ADAM10基因缺失對(duì)CaMKⅡα的表達(dá)，膠質(zhì)細(xì)胞增殖及突觸可塑性的影響。
　　方法：采用PCR鑒定ADAM10cKO小鼠基因型，純合子作為實(shí)驗(yàn)組用于實(shí)驗(yàn)研究；RT-PCR檢測9月齡ADAM10cKO小鼠（n=3）和C57BL/6對(duì)照組小鼠（n=3）的CaMKⅡα和GFAP的mRNA轉(zhuǎn)錄水平；Western blot檢測9月齡ADAM10cKO小鼠（n=5）和C57BL/6對(duì)照組小鼠（n=

3、5）的CaMKⅡα和GFAP的蛋白表達(dá)水平；Nissl染色觀察12月齡ADAM10cKO小鼠（n=5）和C57BL/6對(duì)照組小鼠（n=5）的神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目；免疫熒光法標(biāo)記12月齡ADAM10cKO小鼠（n=5）和C57BL/6對(duì)照組小鼠（n=5）星形膠質(zhì)細(xì)胞,觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量及分布；LTP測定研究ADAM10cKO小鼠（n=3）和C57BL/6對(duì)照組小鼠（n=3）小鼠的突觸可塑性。
　　結(jié)果：RT–PCR檢測結(jié)果顯示皮層和

4、海馬組織中實(shí)驗(yàn)組GFAP的mRNA轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照組相比顯著增高(n=3,P<0.01)，皮層和海馬組織中實(shí)驗(yàn)組CaMKⅡα的mRNA轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照組相比顯著增高(n=3,P<0.01)；Western blot檢測結(jié)果顯示皮層和海馬組織中實(shí)驗(yàn)組GFAP的蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比顯著增高(n=5,P<0.01)，皮層和海馬組織中實(shí)驗(yàn)組CaMKⅡα的蛋白表達(dá)量與對(duì)照組相比顯著增高(n=5,P<0.01)；免疫熒光結(jié)果顯示在海馬和皮層組織中實(shí)驗(yàn)