小麥avenin-likeb轉(zhuǎn)基因純合株系的篩選鑒定.pdf

1、小麥Avenin-likeb蛋白是一類新型種子儲(chǔ)藏蛋白，含有18或19個(gè)半胱氨酸殘基（Cys），預(yù)測可以形成分子間二硫鍵，進(jìn)而影響小麥面粉的加工品質(zhì)，但目前該功能預(yù)測尚未經(jīng)研究證實(shí)。
　　本研究在獲得轉(zhuǎn)avenin-like b基因單株的基礎(chǔ)上，分別在基因和蛋白質(zhì)水平上對(duì)轉(zhuǎn)基因植株及其后代進(jìn)行篩選鑒定。利用PCR技術(shù)篩選陽性轉(zhuǎn)基因植株；運(yùn)用Southernblot技術(shù)檢測小麥轉(zhuǎn)基因植株中的外源avenin-like基因的拷貝數(shù)；通

2、過SDS-PAGE和Western blot技術(shù)檢測外源目的基因是否在小麥胚乳中穩(wěn)定地表達(dá)。經(jīng)過連續(xù)5代轉(zhuǎn)基因小麥株系的篩選，獲得了能夠穩(wěn)定表達(dá)Avenin-like b蛋白的轉(zhuǎn)基因純合株系，此外，對(duì)小麥Avenin-likeb蛋白的存在形式等進(jìn)行了分析。本研究取得的主要研究結(jié)果如下：
　　（1）優(yōu)化了利用小麥Avenin-likeb蛋白多克隆抗體對(duì)小麥中外源Avenin-likeb表達(dá)蛋白的檢測條件，為利用Westernblot

3、方法分析轉(zhuǎn)基因植株中Avenin-likeb蛋白的表達(dá)水平奠定了基礎(chǔ)；
　　（2）經(jīng)過連續(xù)五代（T0-T4）的篩選，分別獲得了3個(gè)以鄭麥9023、2個(gè)以鄂麥12為受體的小麥轉(zhuǎn)基因純合株系；
　?。?）與對(duì)照株系相比，轉(zhuǎn)基因小麥面粉的面筋指數(shù)和SDS沉降值體積都得到了顯著性地改善，證實(shí)了過表達(dá)小麥Avenin-likeb蛋白對(duì)面粉的加工品質(zhì)具有正向效應(yīng)；
　　（4）SDS-PAGE和Western blot分析表明，小麥