番石榴葉對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦免疫功能的影響及其抗WSSV有效成分初探.pdf

1、白斑綜合征（WSS）自1988年首次發(fā)現(xiàn)以來(lái)，到2000年幾乎席卷世界沿海各國(guó)，對(duì)全球?qū)ξr養(yǎng)殖業(yè)造成毀滅性的打擊。至目前為止，由于對(duì)WSS仍無(wú)有效的治療方法，因此對(duì)其進(jìn)行早期預(yù)防就顯得極為重要。番石榴葉水提取物可以有效地消除海水中WSSV的感染活性，具備開發(fā)成為針對(duì)WSSV水體消毒劑的可能性。為了確定其在對(duì)蝦養(yǎng)殖中使用的可行性，本文進(jìn)行了以下三個(gè)方面的研究：
　　首先，在基礎(chǔ)飼料中添加六種比例的番石榴葉(0％、0.025%、0.0

2、5%、0.1%、0.2%、0.4%，分別標(biāo)記為G0、G1、G2、G3、G4、G5)飼喂斑節(jié)對(duì)蝦(體重為1.576±0.011 g)56天，研究番石榴葉對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦生長(zhǎng)和非特異性免疫功能的影響，評(píng)價(jià)番石榴葉在對(duì)蝦養(yǎng)殖中作為水體消毒劑使用的安全性。結(jié)果表明：試驗(yàn)組斑節(jié)對(duì)蝦增重率均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），其中G1組增重率最高，達(dá)到308.44%。飼料中添加番石榴葉投喂斑節(jié)對(duì)蝦可以提高對(duì)蝦血清和肝胰腺中酚氧化酶（PO）、超氧化物歧化酶（S

3、OD）、酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、一氧化氮合成酶（NOS）和溶菌酶（LSZ）的活力。其中血清中 PO、SOD，肝胰腺 SOD、ACP、AKP均在G1組最高，達(dá)到7.50U/ml、178.33 U/ml、57.32 U/g protein、32.67kim unit/g protein、27.10kim unit/g protein，除血清SOD外，均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），后隨著番石榴葉添加比例的增加而降低。血

4、清ACP、AKP、LSZ和肝胰腺LSZ活力隨著番石榴葉添加比例的增加而增高，在G3組最高，達(dá)到6.79 kim unit/100ml、11.66 kim unit/100ml、53.95 U/ml和3459.95 U/mg protein，且均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），后隨著添加比例的增加而降低。血清 TNOS活力隨著番石榴葉添加比例的增加而增高，在G4組最高，顯著高于對(duì)照組（P<0.05），達(dá)到64.80 U/ml，后隨著添加比

5、例的增加而降低。因此，在對(duì)蝦飼料中添加番石榴葉投喂斑節(jié)對(duì)蝦，不僅可以促進(jìn)斑節(jié)對(duì)蝦生長(zhǎng)，還可以提高對(duì)蝦的免疫機(jī)能，可以認(rèn)為作為水體消毒劑使用對(duì)對(duì)蝦不存在負(fù)面影響，是安全的。
　　其次，為了探討番石榴葉除了消除水體中WSSV的感染活性外，是否可以殺滅對(duì)蝦體內(nèi)的病毒，從而可以在飼料中使用的可行性，研究了番石榴葉在飼料中使用對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦抗白斑綜合征病毒（WSSV）的影響，包括以下兩個(gè)方面的內(nèi)容：1、對(duì)人工感染 WSSV的對(duì)蝦投喂含不同濃度（

6、0%、0.1%、0.2%、0.4%、0.8%）番石榴葉的飼料，在試驗(yàn)過(guò)程中觀察死亡情況，觀察治療效果；2、對(duì)連續(xù)飼喂添加不同濃度（0%、0.025%、0.05%、0.1%、0.2%、0.4%）番石榴葉3d、6d、12d、24d的對(duì)蝦分別進(jìn)行人工感染W(wǎng)SSV，統(tǒng)計(jì)累計(jì)死亡率，觀察預(yù)防效果。結(jié)果顯示：治療試驗(yàn)中飼喂含番石榴葉飼料的試驗(yàn)組半數(shù)死亡時(shí)間均早于對(duì)照組；預(yù)防試驗(yàn)中添加番石榴葉濃度為0.05%、連續(xù)飼喂6d或添加番石榴葉濃度為0.02

7、5%，連續(xù)飼喂12d，對(duì)蝦的半數(shù)死亡時(shí)間出現(xiàn)均比對(duì)照組晚。表明：對(duì)蝦感染 WSSV后再飼喂番石榴葉，番石榴葉對(duì)已感染斑節(jié)對(duì)蝦治療作用不明顯；而對(duì)蝦先飼喂番石榴葉后人工感染 WSSV，可明顯提高對(duì)蝦的抗病力，且番石榴葉的添加濃度和投喂時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)斑節(jié)對(duì)蝦抗 WSSV的能力均有影響，添加番石榴葉濃度為0.025%、連續(xù)飼喂12d和添加番石榴葉0.05%，連續(xù)飼喂6d，斑節(jié)對(duì)蝦抗病力均可明顯提高。
　　最后，本實(shí)驗(yàn)利用有機(jī)萃取技術(shù)，對(duì)番石

8、榴葉水提取物進(jìn)行了初步分離，得到石油醚相(S)、乙酸乙酯相(Y)、正丁醇相(Z)和水相(W)四個(gè)組分。然后，通過(guò)人工感染實(shí)驗(yàn)，確定了各組分抗WSSV的效果，并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究了番石榴葉水提取物及各組分對(duì)WSSV的影響。人工感染的結(jié)果顯示：用乙酸乙酯相與正丁醇相這兩種組分分別處理WSSV后，對(duì)蝦在用WSSV人工感染后未出現(xiàn)死亡，而用石油醚組分處理WSSV后，對(duì)蝦在用WSSV人工感染后的第5天開始出現(xiàn)死亡，第12天時(shí)全部死亡，表明番石榴葉中