在hTau小鼠及Ⅰ型糖尿病小鼠中激活EphB2受體降低tau磷酸化的機(jī)制研究.pdf

1、【背景】EphB2是受體酪氨酸激酶家族中的一個亞型,在海馬中表達(dá)豐富,對突觸的發(fā)育和信號傳導(dǎo)起重要作用。研究證實,在阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)患者和AD轉(zhuǎn)基因模型小鼠海馬中的EphB2表達(dá)下降,而且海馬齒狀回表達(dá)EphB2慢病毒質(zhì)?？梢阅孓D(zhuǎn)AD模型小鼠(hAPPJ20)的NMDA受體依賴的長時程降低,改善學(xué)習(xí)記憶障礙。我們以前的研究證實細(xì)胞水平激活EphB2受體可以降低tau磷酸化。但是整體水平EphB

2、2是否調(diào)節(jié)tau磷酸化及其機(jī)制尚未見報道。糖尿病和AD有著極其密切的關(guān)系,糖尿病小鼠海馬中tau磷酸化程度明顯升高,EphB2是否參與了糖尿病誘導(dǎo)的AD樣病理改變尚未見報道。
　　【目的】在體水平探討EphB2對tau磷酸化的作用及其機(jī)制及EphB2對高糖引起的tau磷酸化的作用。
　　【方法】用立體定位注射的方法在hTau小鼠海馬CA3區(qū)給予ephrinB1/Fc,對照組給予Fc。免疫組化和western-blot檢測Ep

3、hB2在海馬中的表達(dá),EphB2活性檢測試劑盒檢測EphB2的活性變化。免疫熒光和western-blot檢測tau磷酸化的相關(guān)位點。Western-blot檢測GSK3β,Akt,PI3K的表達(dá),。
　　用尾靜脈注射的方式構(gòu)建I型糖尿病小鼠模型,按血糖濃度的高低分為輕度高血糖組(7-10mmol/L)、中度高血糖組(10-20mmol/L)、高度高血糖組(20-30mmol/L)。Western-blot檢測EphB2及tau磷

4、酸化位點Ser396,Thr231在不同血糖濃度的糖尿病小鼠海馬中的表達(dá)。Western-blot檢測Ser396,Thr231在給予不同濃度葡萄糖含量的培養(yǎng)基的HEK293細(xì)胞中的表達(dá)及過表達(dá)并激活EphB2后,Ser396,Thr231的表達(dá)變化。
　　【結(jié)果】在擬AD轉(zhuǎn)基因小鼠(hTau)模型中,EphB2的表達(dá)量及活性均未見明顯變化。CA3區(qū)給予ephrinB1/Fc激活EphB2受體后,我們觀察到hTau小鼠的tau磷酸

5、化水平明顯降低,同時激活磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)和蛋白激酶B(protein kinase B,PKB或Akt),抑制糖原激酶合酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)。
　　在四氧嘧啶構(gòu)建的I型糖尿病模型小鼠中,中(10-20mmol/L)、高(20-30mmol/L)血糖組小鼠海馬中EphB2表達(dá)明顯下降,tau磷酸化明