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文檔簡介
1、目的:利用活體成像技術(shù)研究?;撬嵩谥匦惋B腦創(chuàng)傷裸鼠體內(nèi)實時代謝分布變化情況,并觀察腦創(chuàng)傷后腦組織TauT、GFAP表達,探討?;撬釋χ匦惋B腦創(chuàng)傷的治療機制。
方法:本課題分為活體成像和免疫組化兩部分,①活體成像部分:取6~8周齡BALB/C裸鼠32只,隨機數(shù)字表法分為正常(normal)組、假手術(shù)(sham)組、腦創(chuàng)傷染料(TBI-Cy7)組和?;撬嶂委?TBI-Tau)組。后兩組用液壓打擊儀制作左側(cè)腦創(chuàng)傷模型,sham組
2、在左側(cè)相同位置只開骨窗,不予打擊。TBI-Tau組、sham組傷后立即尾靜脈注射Cy7-Tau,normal組不做處理,直接注射Cy7-Tau,TBI-Cy7組注射游離Cy7,劑量均為5mg/Kg。給藥后1、2、4、8、12、24 h行活體成像;②免疫組化部分:選用6~8周齡BALB/C小鼠48只,隨機數(shù)字表法分為假手術(shù)(sham)組、腦創(chuàng)傷(TBI)組和牛磺酸治療(TAU)和,造模同上,TAU組、sham組傷后立即尾靜脈注射Tau(5
3、mg/Kg),TBI組注射無菌生理鹽水(5mg/Kg)。給藥后12h、24h每組各處死8只,4%多聚甲醛灌注后冰凍連續(xù)切片,行HE染色、GFAP-DAPI、TauT熒光免疫組化染色。
結(jié)果:
1.活體成像:給藥后Tau在正常裸鼠體內(nèi)呈全身彌漫分布,主要通過腎臟代謝,12h大部分均可排出體外,僅剩膽囊存較高濃度Tau; sham組手術(shù)切口皮緣24h仍有較高濃度Tau富集;TBI-Tau組給藥后24h腦創(chuàng)傷區(qū)域、
4、皮膚切口處有Tau特異富集,Tau在離體腦組織的分布范圍與腦創(chuàng)傷區(qū)域一致;Cy7在裸鼠體內(nèi)彌漫分布于皮下,無特定器官富集趨勢;
2.HE染色:sham組神經(jīng)細胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)正常,未見明顯腦創(chuàng)傷;TBI組腦組織充血、水腫,灰質(zhì)和白質(zhì)彌漫性出血灶,腦皮質(zhì)分層結(jié)構(gòu)消失,灰白質(zhì)分界不清,并伴有大量多形核炎性細胞聚集;Tau組腦組織輕度充血、水腫,實質(zhì)內(nèi)有局灶性出血,并伴有多形核炎性細胞聚集。
3.TauT熒光免疫組化結(jié)
5、果:TBI后12h,各組均有TauT表達于傷側(cè)大腦皮質(zhì)和海馬的血管內(nèi)皮細胞,偶見個別神經(jīng)細胞,與Sham組比較,TBI組12h的皮質(zhì)和海馬中TauT顯著降低(p<0.05),TAU組的TauT均顯著高于TBI組(p<0.05),傷后24h,與sham組相比,TBI組腦皮質(zhì)無顯著變化,海馬顯著降低,TAU組TauT表達較sham組顯著增高,熒光位于血管內(nèi)皮細胞及少數(shù)神經(jīng)細胞,數(shù)量增多,熒光強度增強。
4.GFAP熒光免疫組化
6、結(jié)果:TBI后12小時,sham組中,星形膠質(zhì)細胞內(nèi)GFAP陽性反應較低,細胞胞體較小,突起纖細。反應性星形細胞主要局限于TBI組、TAU組腦創(chuàng)傷側(cè)胼胝體及海馬,表現(xiàn)為細胞GFAP陽性反應增加,染色加深,突起增多。傷后24小時,TBI組、TAU組星形細胞胞體肥大,GFAP陽性反應細胞明顯增加,在海馬組織中尤其明顯。無論胼胝體還是海馬組織,TBI組的GFAP在12h、24h均顯著較sham組升高(p<0.05),而Tau組與TBI組無顯著
7、區(qū)別(p>0.05)。
結(jié)論:
1.活體成像技術(shù)可實時監(jiān)測Tau在裸鼠體內(nèi)的分布、代謝,Tau主要通過腎臟代謝;TBI后Tau特異性富集于腦創(chuàng)傷區(qū)域、皮膚切口處,離體腦組織Tau的分布范圍與腦創(chuàng)傷區(qū)域一致;
2.重型顱腦創(chuàng)傷后小鼠腦組織形態(tài)學發(fā)生明顯改變,皮層、海馬區(qū)神經(jīng)細胞結(jié)構(gòu)受損嚴重,予?;撬嶂委熀?4h可見神經(jīng)細胞形態(tài)損傷有所減輕,神經(jīng)細胞超微結(jié)構(gòu)趨于正常,受損輕微,從形態(tài)學方面表現(xiàn)出了較
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