埋植MLT銀黑狐的卵巢組織學(xué)及卵母細(xì)胞體外成熟的研究.pdf

1、HistologicalstudyonovaryofMLTHiddeninVulpesFulvaanditsoocytesinvitromaturationThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyWangXiao(CollegeofAnimalScienceandVet

2、erinaryMedicine)Supervisor：MaZefangCuiKaiQingdaoChina青島農(nóng)業(yè)，J、學(xué)碩士學(xué)融淪文摘要埋植MLT銀黑狐的卵巢組織學(xué)及卵母細(xì)胞體外成熟的研究成熟的研冤摘要為了探究休情期埋植褪黑激素(Melatonin，MLT)銀黑狐卵巢能否用于體外成熟(IVM)，進(jìn)行了卵巢組織學(xué)和卵母細(xì)胞IVM的研究，為體外受精和胚胎移植等生物工程奠定基礎(chǔ)，并為卵巢獲取開辟了另一條新途徑。試驗(yàn)于2012年11月中旬，采

3、集30只8月齡，埋植MLT的健康雌性銀黑狐卵巢共計(jì)60枚。隨機(jī)選取10只銀黑狐的左側(cè)10枚卵巢，用于觀察卵泡以及卵母細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)，并用目鏡測(cè)微尺測(cè)量各級(jí)卵泡和卵母細(xì)胞的直徑，平均每個(gè)卵巢觀察并測(cè)量原始卵泡6～8個(gè)、初級(jí)卵泡5～7個(gè)、次級(jí)卵泡6～8個(gè)、三級(jí)卵泡5～7個(gè)、成熟卵泡l～3個(gè)：右側(cè)10枚卵巢，用于觀察各級(jí)卵泡發(fā)育過程中卵母細(xì)胞超顯微結(jié)構(gòu)，平均每個(gè)卵巢觀察原始卵泡6～7個(gè)、初級(jí)卵泡4～6個(gè)、次級(jí)卵泡3～4個(gè)、三級(jí)卵泡2～3個(gè)、成熟

4、卵泡I～2個(gè)；其余40枚卵巢用作卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)，以TCMl99作為IVM基礎(chǔ)培養(yǎng)液，添加FSH、LH、GnRH、HCG、PMSG的不同激素組合以及37℃、39℃兩種不同培養(yǎng)溫度、不同卵泡直徑，探究不同因素對(duì)銀黑狐卵母細(xì)胞體外成熟率的影響。研究結(jié)果表明：1埋植MLT銀黑狐卵巢顯微結(jié)構(gòu)分為被膜、皮質(zhì)和髓質(zhì)三部分，被膜由外層生殖上皮和內(nèi)層白膜兩部分組成，在皮質(zhì)分布著大量的生殖腺和不同發(fā)育階段的卵泡，髓質(zhì)由疏松結(jié)締組織構(gòu)成，含有少量平滑肌、神

5、經(jīng)和豐富的血管、淋巴管。卵泡和卵母細(xì)胞的平均直徑范圍分別為3725“一56677岬和3113～11205岬，透明帶平均直徑范圍是334“824岬。原始卵泡時(shí)，未見透明帶結(jié)構(gòu)；初級(jí)卵泡時(shí)，顆粒細(xì)胞與卵母細(xì)胞之前出現(xiàn)不完整的透明帶：次級(jí)卵泡顆粒細(xì)胞之間逐漸出現(xiàn)一些大小不等的腔隙，未形成完整的卵泡腔，透明帶增厚并趨于完整：三級(jí)卵泡顆粒細(xì)胞間的腔隙逐漸匯成卵泡腔，腔內(nèi)充滿卵泡液：成熟卵泡時(shí)，透明帶厚度最大，顆粒細(xì)胞具有踢顯的放射冠結(jié)構(gòu)。2埋植M

6、LT銀黑狐超微結(jié)構(gòu)可見原始卵泡卵母細(xì)胞胞質(zhì)中分布有豐富的線粒體，可見大量不典型的高爾基復(fù)合體和或大或小深染的不均勻嗜鋨顆粒：初級(jí)卵泡階段線粒體數(shù)量增加，高爾基體數(shù)量減少，脂滴直徑變大，部分脂滴有1～3層滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)圍繞，少量皮質(zhì)顆粒出現(xiàn)，開始形成不完整的透明帶，且有短小的微絨毛斜伸入透明帶內(nèi)：次級(jí)卵泡階段，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形成短的扁囊狀結(jié)構(gòu)，皮質(zhì)顆粒數(shù)量增多。三級(jí)卵泡多層顆粒細(xì)胞間隙融合成卵泡腔，透明帶內(nèi)有長(zhǎng)而多的微絨毛插入，偶爾可見到一個(gè)卵泡內(nèi)有