炎癥對C57BL-6J小鼠肝臟膽固醇積聚及纖維化的影響.pdf

1、第一部分建立肝臟慢性炎癥模型
　　 目的:通過向C57BL/6J小鼠皮下注射10％酪蛋白(Casein)，在小鼠體內(nèi)，誘導(dǎo)發(fā)生系統(tǒng)性、低封度、慢性炎癥，比較炎癥在小鼠肝臟內(nèi)對膽固醇蓄積、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及纖維化的影響。
　　 方法:選取8周齡雄性C57 BL/6J小鼠共24只，隨機分組為:對照組(n=6，N)、炎癥刺激組(n=6，NC)、高膽固醇飲食組(n=6，H)和高膽固醇飲食+炎癥刺激組(n=6，HC)。10％酪蛋白0.5

2、 ml向炎癥組小鼠隔日皮下注射，同時，等量生理鹽水向非炎癥組小鼠注射。其中高膽固醇飲食組和高膽固醇飲食+炎癥刺激組喂養(yǎng)高膽固醇飼料，主要為1.25％膽固醇、0.5％膽酸和15％脂肪，N組和NC組進行喂養(yǎng)普通飼料。14周后處死小鼠，收集血清和肝臟組織樣本，采用ELISA法及RT-PCR法測定血清及肝臟組織中炎癥因子水平。
　　 結(jié)果:與非炎癥組相比，予以炎癥刺激的兩組小鼠血清中白介素-6(IL-6)和血清淀粉樣蛋白（SAA）濃度水

3、平顯著升高，肝臟組織中單核細胞趨化蛋白(MCP)1和腫瘤壞死因子α（TNF-α）的mRNA表達水平也明顯增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論:向C57BL/6J小鼠隔天皮下注射10％酪蛋白14周，能在體內(nèi)誘導(dǎo)小鼠發(fā)生慢性炎癥，成功制造小鼠慢性炎癥模型。
　　 第二部分炎癥對小鼠肝臟膽固醇積聚的影響
　　 目的:通過C57BL/6J小鼠炎癥模型，研究炎癥對小鼠血清及肝組織脂質(zhì)的水平、膽固醇代謝相關(guān)基因mRNA水平

4、影響。
　　 方法:通過油紅O染色觀察肝組織脂質(zhì)沉積，通過酶法測定小鼠血清中總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平，通過化學(xué)酶促-比色法測定小鼠肝組織中總膽固醇(TC)、游離膽固醇(FC)、膽固醇酯(CE)的含量。通過實時定量PCR檢測肝臟膽固醇代謝相關(guān)基因mRNA水平。
　　 結(jié)果:肝組織油紅O染色結(jié)果顯示，炎癥組紅染顆粒較非炎癥組增多，其中以HC組增多最為明顯。血清膽固醇檢測結(jié)果提示，高

5、膽固醇飲食可以增加血清中TC、LDL、HDL濃度，但炎癥能降低其在血清中的濃度。肝組織膽固醇測定結(jié)果提示，NC、H、HC三組TC、FC、CE含量均較N組有所增加，且以HC組最為顯著(P＜0.05)。PCR結(jié)果提示，炎癥刺激下肝臟膽固醇代謝相關(guān)基因mRNA水平均明顯增高，其中以HC組增高最為顯著。
　　 結(jié)論:說明炎癥可以通過影響膽固醇的攝入和合成導(dǎo)致肝臟膽固醇異常積聚。同時，由于炎癥促進小鼠的膽固醇從血液向肝臟異常積聚而致血液中

6、膽固醇水平相對減低。
　　 第三部分炎癥對小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及肝纖維化的影響
　　 目的:通過C57BL/6J小鼠炎癥模型，研究炎癥對小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及肝纖維化的影響。
　　 方法:通過天狼猩紅和Masson三色染色觀察肝形態(tài)改變以及纖維化程度，通過免疫組化檢測肝纖維化相關(guān)蛋白。通過實時定量PCR檢測小鼠內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及肝纖維化相關(guān)基因mRNA水平。
　　 結(jié)果:肝組織天狼猩紅和Masson三色染色結(jié)果顯示，NC、

7、H、HC三組纖維化程度均較N組增多，其中以HC組最為明顯。PCR結(jié)果提示，與N組相比，炎癥刺激下內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及促肝纖維化相關(guān)基因mRNA水平均明顯增高，其中以HC組增高最為顯著;而抗纖維化相關(guān)基因的合成減少，其中以HC組減少最為明顯。免疫組化結(jié)果顯示肝纖維化相關(guān)蛋白表達情況與基因相符。
　　 結(jié)論:說明炎癥導(dǎo)致的肝臟膽固醇積聚與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有明顯的相關(guān)性。炎癥可以通過增加促纖維化因子和抑制抗纖維化因子表達，從而促進肝纖維化發(fā)生和發(fā)展