高脂高膽固醇飲食導(dǎo)致C57BL-6J小鼠肺脂質(zhì)蓄積及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、背景：大量研究已經(jīng)證實(shí)脂代謝異?？梢詫?dǎo)致多器官損傷，其中已經(jīng)進(jìn)行深入研究的是脂代謝異常對(duì)心腦血管、肝臟、胰腺、腎臟、等器官的損傷；高脂和炎癥狀態(tài)下的巨噬細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、胰島β細(xì)胞以及腎小球系膜細(xì)胞等多種細(xì)胞類型異常的脂質(zhì)蓄積是脂代謝異常多器官損傷的病理生理學(xué)基礎(chǔ)。
　　但是對(duì)于脂代謝異常是否會(huì)對(duì)肺組織造成損傷的研究，國(guó)內(nèi)外才剛剛起步。近年來，一些與脂代謝相關(guān)基因的基因敲除實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，脂代謝異?？梢詫?dǎo)致肺組織異常的

2、脂質(zhì)蓄積和病理改變，但尚未見使用野生型小鼠進(jìn)行“高脂飲食所致脂代謝紊亂與肺損傷”的研究。
　　目的：本研究在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中采用高脂高膽固醇飲食(Paigen飲食)喂飼C57BL/6J小鼠，觀察是否可以導(dǎo)致小鼠肺組織的脂質(zhì)蓄積，且是否具有時(shí)間依賴性；在體外實(shí)驗(yàn)中以人肺癌細(xì)胞系(A549細(xì)胞)作為肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞模型，觀察高脂狀態(tài)下肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的脂質(zhì)蓄積，研究肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞是否是脂質(zhì)蓄積的靶細(xì)胞，以及炎癥對(duì)高脂狀態(tài)下肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞

3、脂質(zhì)蓄積的影響及可能的作用機(jī)制。
　　方法：(1)66只雄性6-8周齡C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為兩組，分別喂飼普通飲食和高脂高膽固醇飲食，于喂養(yǎng)12W、16W、20W三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，檢測(cè)血清中脂質(zhì)含量，包括總膽固醇(Total Cholesterol，TC)、甘油三酯(Triglycerides，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(Low-densityLipoprotein Cholesterol，LDL-c)和高密度脂蛋白膽固醇(Hig

4、h-densityLipoprotein Cholesterol，HDL-c)；小鼠主動(dòng)脈作冰凍切片，進(jìn)行油紅O染色觀察粥樣硬化斑塊的形成情況；肺組織透射電鏡以及冰凍切片油紅O染色，觀察肺組織脂質(zhì)蓄積情況及其形成脂滴的細(xì)胞定位。
　　(2)人肺腺癌細(xì)胞株A549細(xì)胞分別給予對(duì)照組、高脂組[100μg/ml LDL]、炎癥組[300ng/ml LPS]、聯(lián)合處理組[100μg/mlLDL+300ng/ml LPS處理24小時(shí)后，油紅

5、O染色檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積情況；Real-time PCR檢測(cè)SREBP2、HMGCoA還原酶、LDLr等基因表達(dá)情況；Western blot檢測(cè)SREBP2、LDLr、ABCA1等蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：(1)高脂高膽吲醇飲食在導(dǎo)致C57BL/6J小鼠血清脂質(zhì)譜異常和主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化的同時(shí)，不同時(shí)間點(diǎn)C57BL/6J小鼠肺組織油紅0染色結(jié)果提示該飲食還可以導(dǎo)致C57BL/6J小鼠肺組織出現(xiàn)脂質(zhì)蓄積，并隨著時(shí)間延長(zhǎng)而加劇。

6、r>　　(2)肺組織透射電鏡顯示：與對(duì)照組相比，高脂高膽固醇喂養(yǎng)組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞中的脂質(zhì)蓄積明顯增多。
　　(3)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果：油紅O染色結(jié)果顯示：聯(lián)合處理組A549細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積比其它三組嚴(yán)重。Real-time PCR結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，高脂組的SREBP2、HMGCoA還原酶、LDLr mRNA表達(dá)水平反饋性下調(diào)；聯(lián)合處理組各基因mRNA的表達(dá)水平下調(diào)程度低于高脂組；蛋白表達(dá)變化趨勢(shì)與基因表達(dá)基本一致。與對(duì)照組相比，高