血管生長抑制素和CD34在膽管癌組織中的表達及其臨床意義的研究.pdf

1、目的: 原發(fā)腫瘤的生長、生存及轉(zhuǎn)移均依賴于其病灶局部血管的新生以提供營養(yǎng)，這個過程叫做血管生成。近幾年來對實體腫瘤血管形成的研究已取得較大進展。在腫瘤血管形成的調(diào)節(jié)方面，已發(fā)現(xiàn)許多血管形成的生長因子和抑制因子。因此，腫瘤的血管系統(tǒng)已成為一個有希望的、新的抗腫瘤治療靶點。人們已致力于開發(fā)和研究能破壞或抑制血管生成、有效地阻止腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移的藥物，這類藥物稱為腫瘤血管生成抑制劑，如血管生長抑制因子(angiostatin，AS)。

2、CD34是內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物之一，參與血管生成，可作為MVD定量的指標(biāo)，而且具有較高的特異性和敏感性，是評估新生血管的金標(biāo)準(zhǔn)，并與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究采用原位雜交法檢測膽管癌組織中AS的表達以及采用免疫組化法檢測CD34的MVD值，并分析其與膽管癌臨床病理參數(shù)間的關(guān)系，以探討AS和CD34與膽管癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的相關(guān)性。 材料和方法: 1．實驗對象：收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院外科1999-2006年外科手術(shù)治療的膽管癌組

3、織標(biāo)本45例，病理證實均為膽管癌。其中男18例，女27例，年齡18-76歲。根據(jù)WHO病理分類標(biāo)準(zhǔn)為高、中分化腺癌者31例，低分化腺癌14例。腫瘤部位：膽總管中下段27例、肝門部18例。經(jīng)肉眼或病理所見有浸潤轉(zhuǎn)移者34例，無轉(zhuǎn)移者11例。所有患者術(shù)前均未接受化療和放療。另取良性膽管標(biāo)本11例作為對照。 2．實驗方法：本研究采用原位雜交法檢測膽管癌組織中AS的表達。采用人AS原位雜交檢測試劑盒進行檢測。針對人AS的cDNA探針序列

4、如下：1:5`--GCACT TGGCI、 GTTGG TTGTA TGGCA C：2：5`--CGTCA GGATT GCGGCAGTAG TTTC AT；3：5`--CTGCT CTTTG CTGTG GTACT、GGAAq、GAC細(xì)胞漿染成棕黃色為陽性，結(jié)果用Meta Morph Imaging System軟件處理，按圖象灰度結(jié)果分為五個等級：無染色，灰度值不少于130，為陰性(一)；輕微染色，灰度值在125～130之間，為弱陽

5、性(±)；染色較淺，灰度值在115～125之間，為陽性(+)；染色較深，灰度值在105～115之間，為較強陽性(++)；染色深，灰度值不大于105，為強陽性(+++)。采用免疫組化法檢測CD34的MVD值，并分析其與膽管癌臨床病理參數(shù)間的關(guān)系。 結(jié)果: 1．AS在不同膽管組織中的表達 在膽管癌組和良性組織中均可見AS陽性染色，且表達主要定位于腫瘤細(xì)胞胞漿中，呈彌漫性或散在分布的棕黃色顆粒。AS在膽管癌組織內(nèi)的表達

6、呈明顯的異質(zhì)性，大部分癌組織邊緣區(qū)細(xì)胞染色強于中心區(qū)，部分癌組織壞死周邊區(qū)可見強陽性染色出現(xiàn)，內(nèi)皮細(xì)胞及血管壁可見均勻的AS陽性染色。良性組織AS陽性表達率18.2％(2/11)，膽管癌組織陽性表達率60.0％(27/45)，二者相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(X<'2>=6.19，P<0.05)(見表1)。 2．膽管癌組織中AS的表達與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 AS的表達與性別、年齡、腫瘤部位及分化程度等無相關(guān)性(P>0.05)；

7、而與腫瘤有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有非常顯著性相關(guān)(P<0.05)。 3．MVD在不同膽管組織中的表達 CD34抗體特異表達于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)中。MVD染色陽性細(xì)胞為血管內(nèi)皮細(xì)胞染成棕黃色或褐色，腫瘤內(nèi)血管分布呈現(xiàn)異質(zhì)性，在腫瘤組織浸潤前緣密度較高，而在硬化壞死區(qū)則較稀疏。11例非腫瘤性膽管組織和45例膽管癌組織的MVD表達率分別為26.80±5.14，31.78±4.41，差異具有顯著意義(t=4.34，P<0.05)(見表3)。

8、 4．MVD在膽管癌組織中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系 MVD在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和無轉(zhuǎn)移組分別為41.23±9.76，30.93±6.12，差異有顯著意義(P<0.05)。 MVD在腫瘤的高中分化與低分化的表達分別為32.62±7.96和39.22±7.75，差異具有顯著意義(P<0.01)。同時MVD的表達與腫瘤部位(膽總管下段為33.42±8.99、肝門部為37.79±10.15)也有顯著性相關(guān)(P<0.01)。而與患

9、者患病的年齡和性別無關(guān)(P>0.05)。 結(jié)論: 1．在國內(nèi)首次進行膽管癌與血管抑素的相關(guān)性研究，本研究結(jié)果顯示AS在膽管癌組織中呈高表達，而AS與年齡、性別及腫瘤的發(fā)生部位、分化程度無關(guān)，與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤的有關(guān)； 2．CD34抗體特異表達于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)中，且在膽管癌組織中呈高表達，CD34與年齡、性別無關(guān)，而與腫瘤的分化程度、發(fā)生部位以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)； 3．本研究結(jié)果提示，AS與CD34