麝香百合和仙客來轉(zhuǎn)Mn-SOD基因植株的獲得及其耐熱性鑒定.pdf

1、本研究以麝香百合、仙客來為材料，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將Mn-SOD基因轉(zhuǎn)入植株中，通過篩選、檢測(cè)，獲得轉(zhuǎn)Mn-SOD基因植株，并研究高溫逆境脅迫對(duì)轉(zhuǎn)基因和未轉(zhuǎn)基因植株的生理機(jī)制的影響，從而為提高其耐熱、抗衰老及其他方面的抗脅迫能力，實(shí)現(xiàn)品種的抗性改良奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下： 1 通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲得麝香百合抗性植株通過研究Mn．SOD基因轉(zhuǎn)化中影響葉片轉(zhuǎn)化效率的多種因素，包括Kan濃度、抑菌素濃度、預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間，侵染菌

2、液濃度和侵染時(shí)間等，確立了50mg／I,Kan，500mg/LCef,2d的預(yù)培養(yǎng)，3d的共培養(yǎng)，OD<,600>為0.6，侵染10min的麝香百合遺傳轉(zhuǎn)化體系，并獲得了百合抗性植株。 2 篩選出仙客來塊莖誘導(dǎo)不定芽培養(yǎng)基和不定芽生根培養(yǎng)基以仙客來種子萌發(fā)產(chǎn)生的塊莖為外植體，誘導(dǎo)分化不定芽的最適培養(yǎng)基為MS+2.0mg/L6-BA+1.0 mg/LNAA，并且遮光處理可提高分化率。仙客來不定芽最適生根培養(yǎng)基為1/2MS+1.0m

3、g/IJBA或MS+1.5mg/LNAA。 3 外源基因的檢測(cè)對(duì)31個(gè)百合抗性株系進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果有9個(gè)株系擴(kuò)增出663bp的特異條帶，而對(duì)照百合植株無特異性條帶出現(xiàn)，初步證明外源基因已轉(zhuǎn)入百合植株中。 分別對(duì)PCR檢測(cè)呈陽(yáng)性的5個(gè)仙客來株系(由周連霞師姐轉(zhuǎn)化所得)和9個(gè)百合株系進(jìn)行Southern雜交檢測(cè)，有3個(gè)仙客來株系檢測(cè)到一條雜交帶，證明Mn．SOD基因已經(jīng)轉(zhuǎn)入到仙客來基因組中；而在百合株系中，未檢測(cè)出雜交條