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文檔簡介
1、目的:血管性癡呆(vascular dementia,VD)是腦血管疾病的常見并發(fā)癥,它是由一系列腦血管因素導致腦組織損害引起的以認知功能障礙為特征的癡呆綜合癥,不僅給患者帶來長期痛苦,嚴重影響其生活質(zhì)量,而且給家庭、社會造成沉重負擔。近一個世紀,由于人類平均年齡的逐步增加,導致癡呆人群的不斷增加,特別是血管性癡呆,在歐洲被認為是繼阿爾茨海默病后導致癡呆的第二位因素,在亞洲可能占有的地位更為重要。因此對血管性癡呆的研究也就顯得特別重要。
2、近年來,自由基損傷與血管性癡呆之間的關(guān)系逐漸成為人們研究的熱點問題。組織中丙二醛(Maleic Dialdehyde,MDA)是脂質(zhì)過氧化物的主要代謝產(chǎn)物,超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活力的高低間接反映了機體清除氧自由基的能力。本研究旨在了解血管性癡呆大鼠海馬組織中SOD和MDA的變化,以進一步探討VD與氧化損傷的關(guān)系,并進一步探討普羅布考對VD模型大鼠智能改善的情況及海馬區(qū)SOD和MDA的影響,為
3、臨床使用普羅布考治療VD提供實驗依據(jù)。
方法:選取健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,將大鼠隨機分為空白模型組、假手術(shù)組、普羅布考組,每組12只。對大鼠采用雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎的方法,造成慢性腦灌注不足所致VD模型。動物模型的篩選標準:術(shù)后7天在各組大鼠進行Morris水迷宮試驗訓練1天,以假手術(shù)組大鼠平均逃避潛伏期的均值為參考值,計算手術(shù)組大鼠平均逃避潛伏期與參考值之差占平均逃避潛伏期的比例,該值>20%
4、定為癡呆鼠。普羅布考組給予普羅布考500mg/kg/d灌胃,假手術(shù)組與空白模型組給予等劑量羧甲基纖維素鈉灌胃。灌胃8周后,開始為期5天的Morris水迷宮實驗,前4天為定位航行試驗,記錄平均逃避潛伏期。第5天進行空間搜索試驗,記錄大鼠穿越原平臺次數(shù)。水迷宮實驗結(jié)束后,制作大腦海馬HE切片,采用光鏡觀察各組大鼠海馬CA1區(qū)的形態(tài)學變化;取海馬組織制成10%勻漿,采用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活力,硫代巴比妥酸(Thibabituric Ac
5、id, TBA)法測MDA含量。通過觀察大鼠行為學、海馬組織形態(tài)學以及檢測海馬組織中SOD、MDA的表達,評價普羅布考對VD大鼠的作用效果。
結(jié)果:
1、一般狀況觀察
早期觀察,手術(shù)后大鼠不能進食,運動減少,反應遲鈍,但無肢體癱瘓。前6天體重逐漸減少,每天降低59左右,第7天大鼠體重開始恢復。上述觀察結(jié)果與文獻所描述的模型后表現(xiàn)大致相符,說明復制的模型成功。
2、行為學測定
6、 用Morris水迷宮觀察VD大鼠學習記憶情況,以大鼠逃避潛伏期代表學習能力,逃避潛伏期越短,學習能力越強。水迷宮訓練的第1天起,空白模型組比假手術(shù)組的逃避潛伏期明顯延長(P<0.01),普羅布考組與空白模型組比較,逃避潛伏期明顯縮短(P<0.01)。第5天空白模型組比假手術(shù)組的穿越平臺次數(shù)顯著減少(P<0.01)。普羅布考組與空白模型組比較,穿越平臺次數(shù)明顯增加(P<0.01)。各組大鼠隨著訓練時間的推移,訓練次數(shù)的增多,尋找平
7、臺的方式在不斷變化,尋找平臺的時間都在縮短,說明學習鍛煉可以增強記憶能力。
3、腦組織SOD活力和MDA含量的測定
空白模型組與假手術(shù)組相比,空白模型組SOD活性明顯降低,差異具有顯著性(P<0.01),MDA含量明顯增加(P<0.01);普羅布考組與空白模型組比較,普羅布考組SOD活性明顯增加(P<0.01),MDA含量明顯降低(P<0.01)。
4、海馬神經(jīng)細胞形態(tài)學觀察
假手
8、術(shù)組海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞層結(jié)構(gòu)緊密,神經(jīng)細胞核完整,胞漿豐富??瞻啄P徒M海馬CA1區(qū)的細胞排列紊亂,神經(jīng)細胞數(shù)明顯減少,許多細胞變得不完整,有的形成碎片,基質(zhì)疏松及微空泡形成。普羅布考組海馬CA1區(qū)的形狀與正常接近,大腦海馬區(qū)細胞排列緊密,層次豐富,細胞數(shù)明顯多于空白模型組,神經(jīng)細胞完整,胞漿豐富,可見少量變性細胞。
結(jié)論:
1、大鼠雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎可以建立血管性癡呆模型。
2、VD大鼠M
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