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文檔簡介
1、乙型肝炎病毒是嚴(yán)重威脅人類健康的一種病毒，特別是對于我國來說。乙型肝炎病毒的X基因只有154個氨基酸，但是它的功能十分復(fù)雜。其對人肝細(xì)胞有短期和長期的影響。了解HBX與肝細(xì)胞相互作用的結(jié)果是研究該疾病發(fā)生的生理和分子機(jī)制的基礎(chǔ)。本論文利用改進(jìn)的酵母雙雜交技術(shù)平臺來研究HBX蛋白質(zhì)與寄主蛋白的相互作用，其內(nèi)容主要有以下幾個方面：
(1)酵母雙雜交誘餌載體pDBleu-X的構(gòu)建。最初的雙雜交系統(tǒng)是invitrogen公司的PR
2、OQUSTTM Two-hybrid system，后經(jīng)實驗室改造在誘餌pDBLeu載體插入一個帶有強(qiáng)啟動子Prrn的GFP作為反選擇標(biāo)記。通過無酶克隆的方式將HBX基因裝入pDBleu中。
(2)構(gòu)建5×cDNA有限文庫，并且鑒定文庫的質(zhì)量。
(3)將pDBleu-X轉(zhuǎn)化Mav203后，進(jìn)行自激活的檢測和3AT濃度的確定。利用改進(jìn)的雙雜交系統(tǒng)，篩選人類肝臟cDNA文庫，對于篩選到的陽性克隆經(jīng)質(zhì)粒拯救、經(jīng)過P
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