線粒體途徑在棕櫚酸誘導(dǎo)INS-1細(xì)胞凋亡的機(jī)制探討.pdf

1、目的:觀察不同濃度棕櫚酸(palmitic acid,PA)對大鼠胰島INS-1細(xì)胞的脂毒性作用,探討線粒體途徑是否介導(dǎo)PA誘導(dǎo)的胰島β細(xì)胞INS-1凋亡及其可能機(jī)制。
　　方法:以大鼠INS-1胰島β細(xì)胞株為實(shí)驗(yàn)對象,在含或不含PA(0.25-1.0mmol/l)的RPMI1640無血清培養(yǎng)基體外培養(yǎng)24h,構(gòu)建游離脂肪酸PA誘導(dǎo)β細(xì)胞INS-1脂性凋亡模型;MTT法測定線粒體琥珀酸脫氫酶活力,反映細(xì)胞線粒體功能改變;Hoech

2、st33342/PI活細(xì)胞熒光染色法觀察INS-1細(xì)胞核形態(tài)改變,測定細(xì)胞凋亡率;RT-PCR法檢測0.5mM棕櫚酸干預(yù)下細(xì)胞caspase-3、caspase-9、Bcl-2、AIFmRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果:在無血清條件下,棕櫚酸干預(yù)24h能顯著誘導(dǎo)INS-1細(xì)胞凋亡。不同濃度PA處理INS-1細(xì)胞,鏡下可觀察到細(xì)胞呈濃度依賴的毒性改變。與正常細(xì)胞相比,PA組細(xì)胞隨PA濃度增加形態(tài)逐漸消失,多數(shù)細(xì)胞收縮甚至呈圓形。MTT法測定

3、線粒體琥珀酸脫氫酶活力,不同濃度棕櫚酸干預(yù)下,OD值降低顯著(p<0.05);Hoechst33342染色在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞的凋亡細(xì)胞核呈致密濃染或呈碎塊狀致密濃染,可見明顯核碎裂。0.5mmol/LPA組細(xì)胞的凋亡率可達(dá)到56.6％,與同濃度對照BSA組相比有顯著差異(p<0.01,n=8);RT-PCR顯示促凋亡因子caspase-3、caspase-9、AIF表達(dá)較BSA組上調(diào),而抗凋亡因子Bcl-2表達(dá)下調(diào),提示內(nèi)源性即線粒