MTDH-AEG-1為靶點(diǎn)的基因疫苗誘導(dǎo)免疫抑制前列腺癌的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移及增強(qiáng)化療藥物紫杉醇敏感性的作用研究.pdf

1、研究目的：
　　(1)、通過(guò)該實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)估以MTDH/AEG-1為靶點(diǎn)的基因疫苗對(duì)小鼠免疫功能的影響。(2)、通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探討以MTDH/AEG-1為靶點(diǎn)的基因疫苗對(duì)小鼠前列腺癌的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移及增強(qiáng)化療藥物紫杉醇敏感性的作用。
　　研究方法：
　　通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)免疫后小鼠脾臟C D4+和C D8+T細(xì)胞亞群及采用CytoTox96Non-Radioactive CytotoxicityAssay試劑盒檢測(cè)細(xì)胞毒性T淋巴

2、細(xì)胞（CTL）反應(yīng)。免疫預(yù)防模型：將C57BL/6雄性小黑鼠（6-8weeks o ld）隨機(jī)分為三個(gè)實(shí)驗(yàn)組（n=8），分別給予PBS、包含Pub-MTDH、Pub的減毒沙門氏菌（108cfu）灌胃飼服免疫；每周免疫一次，共免疫三次。最后一次免疫后一周，均在三組小鼠前列腺原位（左、右背側(cè)葉）接種105RM-1細(xì)胞來(lái)構(gòu)建前列腺原位移植瘤模型，誘導(dǎo)自發(fā)盆腔、腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；記錄各組小鼠腫瘤大小及盆腔、腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)（以HE染色為準(zhǔn)），

3、通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)原位腫瘤中CD8+分子的表達(dá)情況、用Tunel試劑盒檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡情況。治療模型：將C57BL/6雄性小黑鼠（6-8weeks o ld）隨機(jī)分為四個(gè)實(shí)驗(yàn)組：Taxol、Pub、Pub-MTDH、Pub-MTDH+Taxol（n=12），分別在各組小鼠腹部皮下接種105RM-1細(xì)胞，建立皮下移植瘤模型，之后各組小鼠分別在3、7、11天分別給予PBS、Pub、Pub-MTDH、Pub-MTDH的DNA疫苗灌胃飼服

4、免疫三次，Taxol、Pub-MTDH+Taxol組小鼠分別在4、8、12天給予紫杉醇（20mg/kg）用生理鹽水稀釋后行腹腔注射；觀察皮下腫瘤生長(zhǎng)情況，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線圖、小鼠荷瘤生存曲線圖，27天時(shí)取下腫瘤比較大小及重量；通過(guò)Tune l法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡情況、RT-PCR檢測(cè)皮下腫瘤組織中Bcl-2、Bax基因表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　MTDH/AEG-1基因在RM-1細(xì)胞中高表達(dá)，而在小鼠正常組織中表達(dá)非常低。pU

5、b-MTDH/AEG-1DNA疫苗同對(duì)照組Pub、PBS組比較能顯著激發(fā)CD4+和CD8+T細(xì)胞及細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）反應(yīng)；有效抑制RM-1原位前列腺癌生長(zhǎng)（p＜0.001）及盆腔、腹膜后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（p＜0.05）；能明顯增強(qiáng)原位腫瘤中CD8+分子的表達(dá)（p＜0.01），促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡（p＜0.001）。pUb-MTDH/AEG-1DNA疫苗與化療藥物紫杉醇聯(lián)合運(yùn)用同單獨(dú)運(yùn)用MTDH/AEG-1、紫杉醇、pUb治療組相比，能顯

6、著抑制RM-1皮下移植瘤生長(zhǎng)（＊P<0.05）及有效延長(zhǎng)荷瘤小鼠生存時(shí)間（＃P＜0.05），促使腫瘤組織中Bc l-2表達(dá)下調(diào)、Bax表達(dá)上調(diào)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論：
　　以MTDH/AEG-1為靶點(diǎn)的基因疫苗能有效抑制小鼠前列腺癌的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移及增強(qiáng)化療藥物紫杉醇的敏感性。MTDH/AEG-1DNA疫苗與化療藥物紫杉醇聯(lián)合運(yùn)用在前列腺癌的治療中顯示出了良好的優(yōu)越性，期待該基因疫苗還能更好地與外科手術(shù)、放射治療等聯(lián)合運(yùn)用