雌激素對大鼠整體和骨骼肌細(xì)胞糖代謝的影響及其微囊蛋白在其機制中的作用.pdf

1、目前已經(jīng)明確女性在絕經(jīng)前心血管疾病的患病率和死亡率明顯低于同年齡男性,而一旦進入絕經(jīng)期則迅速增加,接近同年齡男性水平,迄今已知這種差異和變化主要和女性體內(nèi)的雌激素水平變化有關(guān)。類似的現(xiàn)象在糖代謝疾病中也可以觀察到。
　　 對于雌激素和糖代謝的關(guān)系,早在20世紀(jì)40年代,就有研究人員在尋找治療糖尿病的藥物時,發(fā)現(xiàn)雌激素可能具有降低血糖的作用。但是在過去很長一段時間里糖尿病一直被列為雌激素使用的相對禁忌癥,這主要是因為在一些臨床工作

2、中觀察到育齡婦女服用口服避孕藥后出現(xiàn)糖耐量下降,對絕經(jīng)后女性進行激素替代治療(hormone replacement treatment,HRT)會導(dǎo)致患者的糖耐量受損。后來發(fā)現(xiàn)口服避孕藥和HRT對糖代謝的損害作用主要是孕激素導(dǎo)致的而不是雌激素引起的,相反正常生理水平的雌激素對糖代謝是存在有益作用的。目前最大的HRT群體研究——美國護士健康研究(Nurses Health Study,NHS)發(fā)現(xiàn)一直堅持服用雌激素的被觀察對象糖尿病發(fā)生

3、率明顯低于未服用者和曾經(jīng)服用者。在2001年美國糖尿病年會(American Diabetes Anniversary,ADA)上報告了心臟和雌/孕激素替代研究(the Heart and Estrogen Progestin Replacement Study,HERS)的結(jié)果:服用雌激素替代治療組,新的糖尿病發(fā)生率降低36％。此外還有眾多的臨床和基礎(chǔ)研究也提示雌激素對于糖代謝有改善的作用。但是一直以來也有部分研究提示雌激素對于糖代謝

4、沒有影響甚至可能存在不利的影響。由此可見,有必要對雌激素和糖代謝的關(guān)系進行深入的探討,以期明確兩者之間的關(guān)系。
　　 近幾年隨著研究的不斷深入,逐漸認(rèn)識到糖尿病和高血壓、冠心病等心血管疾病有著共同的發(fā)病基礎(chǔ)--胰島素抵抗。這就提示在預(yù)防和治療這些疾病上有可能存在相同或類似的方法或手段。迄今不少實驗研究和臨床觀察已經(jīng)證實雌激素對心血管系統(tǒng)有確切的保護作用,并且已經(jīng)對此達(dá)成共識。這就提示雌激素對于同樣以胰島素抵抗為發(fā)病基礎(chǔ)的糖尿病可

5、能也存在一定的保護作用。在目前糖尿病的發(fā)病率和患病率不斷增加,業(yè)已成為世界公共衛(wèi)生面臨的巨大挑戰(zhàn)的背景下,詳細(xì)探討雌激素對于糖代謝的影響以及產(chǎn)生這種影響的內(nèi)在機制,將有助于更全面地了解糖代謝的調(diào)控,有可能為預(yù)防和治療糖尿病提供一個新的視角和思路,具有非常重要的現(xiàn)實意義和社會價值。
　　 正如前述對于雌激素和糖代謝之間的關(guān)系還沒有完全確定,對于雌激素通過何種機制對糖代謝產(chǎn)生影響更是了解不多。新近一些研究提示細(xì)胞膜上的特殊結(jié)構(gòu)——c

6、aveolae可能在雌激素對糖代謝產(chǎn)生作用的機制中發(fā)揮重要作用。Caveolae是1953年在細(xì)胞膜上觀察到的一個特殊結(jié)構(gòu),其發(fā)揮生理功能的標(biāo)志性蛋白被稱為caveolin。caveolin已經(jīng)證實有3個亞型,分別命名為caveolin-1、-2和-3。caveolin-1存在于大多數(shù)的細(xì)胞,以脂肪細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞為最多；caveolin-2的分布和caveolin-1類似,且常與之形成高分子量的異寡聚體；caveo

7、lin-3則主要在骨骼肌、心肌和平滑肌細(xì)胞,以骨骼肌細(xì)胞為最多。起初認(rèn)為caveolae主要和細(xì)胞運輸有關(guān)。現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)許多信號分子集中或定位在caveolae上,并且和caveolin有著密切聯(lián)系。這些信號分子包括Src家族酪氨酸激酶、G蛋白偶聯(lián)受體、Ras MAPK級聯(lián)反應(yīng)成員、NOs和酪氨酸激酶受體等,這就提示caveolae可能和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)密切相關(guān)。新近有資料提示caveolae及其特異蛋白caveolin在雌激素的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中起著

8、重要的作用。如:RazandiM等的研究發(fā)現(xiàn),ER和caveolin相關(guān)并能調(diào)節(jié)其生成；Turi A等發(fā)現(xiàn)雌激素在子宮平滑肌能下調(diào)caveolae的數(shù)量和eaveolin蛋白水平；我室既往的研究發(fā)現(xiàn)提示caveolin-1介導(dǎo)雌激素抑制血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞增殖的作用,caveolae的結(jié)構(gòu)完整是雌激素快速舒張血管效應(yīng)的必須條件。由此可見caveolae、caveolin和雌激素的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)關(guān)系密切,值得深入研究。
　　 在糖代

9、謝方面,目前已經(jīng)明確葡萄糖要進入細(xì)胞內(nèi)需要葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白(glucosetransporters,GLUTs)。在葡萄糖進入細(xì)胞并進行代謝的整個過程中GLUTS既是胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生生理作用的最后一步,又是將葡萄糖轉(zhuǎn)運入細(xì)胞進行代謝的第一步和關(guān)鍵一步,因此GLUTs對于整體和細(xì)胞的糖代謝均起著舉足輕重的作用。迄今已有三組共13種不同功能特性的GLUTs分子被克隆出來,其中最引起人們重視的是GLUT4,它在體內(nèi)以接近最大速度轉(zhuǎn)運葡萄糖,介

10、導(dǎo)著骨骼肌、心臟和脂肪細(xì)胞這些重要的糖代謝器官組織的葡萄糖轉(zhuǎn)運。研究發(fā)現(xiàn)骨骼肌中GLUT4表達(dá)增高會使得胰島素的調(diào)節(jié)作用增強,有效降低糖尿病小鼠的血糖水平；靶向阻斷骨骼肌細(xì)胞中GLUT4的表達(dá),則表現(xiàn)為葡萄糖的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)運水平下降和相應(yīng)組織的胰島素敏感性降低；采用基因敲除的方法構(gòu)造GLUT4缺失的小鼠,可以觀察到在大鼠骨骼肌對葡萄糖的攝入明顯降低。因此目前許多在蛋白水平關(guān)于葡萄糖代謝和胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究多集中在GLUT4。已有資料顯示ca

11、veolae、caveolin和GLUT4關(guān)系密切,如Scherer等在3T3L1細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)caveolin-1和GLUT4可能位于相同的細(xì)胞小囊中；Karlsson的研究顯示大部分GLUT4和caveolin-1共定位,85％的GLUT4定位在caveolae上。
　　 由上述分析可見,caveolae、caveolin既可能在雌激素的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要的作用,又和糖代謝關(guān)系密切。這就提示caveolae、caveolin可能

12、在雌激素對糖代謝的影響中起著一定的作用,雌激素可能是通過caveolae、caveolin的介導(dǎo)實現(xiàn)對糖代謝的影響。但是目前還沒有針對這一問題進行相關(guān)研究。深入探討這一問題將有助于我們對雌激素和胰島素兩種激素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的認(rèn)識,更好地了解這兩種激素之間的相互作用以及對于糖代謝的影響。此外現(xiàn)有關(guān)于caveolae和糖代謝的研究多集中在脂肪細(xì)胞或其前體細(xì)胞——3T3L1細(xì)胞,對于在機體糖代謝起著重要作用的另外一種組織(細(xì)胞)——骨骼肌組織(細(xì)胞

13、)則研究較少。但是肌肉組織特別是骨骼肌是機體在運動狀態(tài)時消耗能量最大的組織/器官,在糖代謝起著舉足輕重作用。所以研究肌肉組織特別是骨骼肌的糖代謝對于研究整體的糖代謝有著重要的意義。深入探討caveolae在雌激素影響糖代謝機制中的作用將有助于更全面地了解糖代謝,從一個新的角度來探討血糖異常的成因,有可能可以為研制調(diào)控血糖的藥物提供一個新的方向。
　　 基于上述理由,本研究選擇骨骼肌作為研究對象,探討雌激素對于糖代謝的影響作用,及

14、其這種影響作用產(chǎn)生的內(nèi)在機制,重點了解caveolae在其中所起著的作用。本課題共分三個部分。第一部分將從整體水平重點探討雌激素對于大鼠空腹血糖、空腹胰島素水平和胰島素敏感指數(shù)的影響,同時觀察大鼠骨骼肌中eaveolin-3蛋白水平的變化。第二部分將用不同藥物對骨骼肌細(xì)胞進行干預(yù),接著測定骨骼肌細(xì)胞的葡萄糖消耗和葡萄糖轉(zhuǎn)運,明確不同干預(yù)措施對于骨骼肌細(xì)胞糖消耗和糖轉(zhuǎn)運的影響。第三部分采用免疫共沉淀的方法重點探討ER、caveolin-3

15、和GLUT4三種蛋白之間的相互作用關(guān)系,深入探討雌激素對于糖代謝產(chǎn)生影響的可能內(nèi)在機制。
　　 本課題從一個新的角度來探討影響糖代謝的可能途徑,有助于進一步了解胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、體內(nèi)葡萄糖代謝及相關(guān)影響因素,有可能為預(yù)防和治療糖尿病提供一個新的視角和思路,為研制抗糖尿病藥物提供一個新的思考方向。
　　 第一章雌激素對大鼠糖代謝和胰島素敏感性的影響及骨骼肌中Caveolin-3的變化
　　 在本研究的第一部分我們采用

16、高脂高糖飼料喂養(yǎng)Wistar大鼠構(gòu)造2型糖尿病模型,并皮下給予雌激素進行干預(yù),觀察雌激素對大鼠空腹血糖、空腹胰島素水平和胰島素敏感指數(shù)的影響,同時觀察大鼠骨骼肌中caveolin-3蛋白水平的變化。
　　 72只雌性Wistar大鼠,先予普通飼料喂養(yǎng)1周,待大鼠適應(yīng)后,行去勢手術(shù)或假手術(shù),手術(shù)時一并取大鼠股四頭肌肉進行分析caveolin-3含量。術(shù)后所有大鼠恢復(fù)一周,而后隨機分為6組:①普通飼料,假手術(shù)組(S+C);②普通飼料

17、,去勢組(O+C)；③普通飼料,去勢+雌激素替代治療組(O+E+C)；④高脂高糖飼料,假手術(shù)組(S+FS)；⑤高脂高糖飼料,去勢組(O+FS)；⑥高脂高糖飼料,去勢+雌激素替代治療組(O+E+FS)。①～⑨組給予常規(guī)飼料,④～⑥組給予高脂高糖飼料。根據(jù)分組進行喂養(yǎng)(記為0月):③和⑥組每天皮下注射17-β雌二醇20ug/kg(17-βE2溶于100ul的蓖麻油中),其余每天皮下注射蓖麻油20ug/kg。共喂養(yǎng)4個月。大鼠每月檢測空腹血糖

18、,空腹胰島素,計算胰島素敏感指數(shù)。第O月加測糖化血紅蛋白(GHbAlc)。4個月后處死所有大鼠復(fù)查上述指標(biāo)。
　　 結(jié)果:
　　 1.1不同組別之間的空腹血糖水平比較
　　 六組大鼠在入組前(即0月時)空腹血糖水平無明顯差異(p>0.05)。
　　 普通飼料喂養(yǎng)的三組[即(S+C),(O+C)或(O+E+C)]中,任意一組的空腹血糖水平在整個研究期間均較0月無顯著變化(p>0.05),三組彼此之間也無明顯

19、差異(p>0.05)。
　　 高脂高糖飼料喂養(yǎng)的三組[即(S+FS),(O+FS)或(O+E+FS)]出現(xiàn)如下變化:(1)和自身入組前(即和自身0月)比較:第1個月血糖較0月略有下降但是沒有統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)；第2個月開始逐漸出現(xiàn)空腹血糖較0月升高但是沒有顯著差異(p>0.05)；第3、4個月空腹血糖較0月有顯著性差異(p<0.05)；(2)和普通飼料喂養(yǎng)的三組[即(S+C),(O+C)或(O+E+C)]中任意一組比較:

20、在第1個月,高脂高糖飼料喂養(yǎng)的任何一組和普通飼料喂養(yǎng)的任何一組相比,空腹血糖略有下降,但是沒有統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)；在第2個月高脂高糖飼料喂養(yǎng)的任何一組和普通飼料喂養(yǎng)的任何一組相比,空腹血糖略有升高,但是沒有統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)；在第3個月,高脂高糖飼料喂養(yǎng)的任何一組和普通飼料喂養(yǎng)的任何一組相比,空腹血糖均有升高,其中(O+FS)和普通飼料喂養(yǎng)的任何一組[即(S+C),(O+C)或(O+E+C)]相比,均有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0

21、.05),而(S+FS)或(O+E+FS)中的任何一組和普通飼料喂養(yǎng)[即(S+C),(O+C)或(O+E+C)]的任何一組相比則沒有統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05)；在第4個月,高脂高糖飼料喂養(yǎng)的任何一組和普通飼料喂養(yǎng)的任何一組相比,空腹血糖均有顯著升高,且均有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05)。(3)高脂高糖飼料喂養(yǎng)的三組之間進行兩兩比較:(S+FS)和(O+E+FS)進行比較在整個研究期間,空腹血糖均無明顯的差異(p>0.05)；(O+FS)和(

22、S+FS)或(O+FS)和(O+E+FS)進行比較,(O+FS)在第1月無明顯升高或減低,在第2個月和第3個月,(O+FS)有升高但是無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.05),(O+FS)在第4個月則有明顯升高,且這種升高有顯著性差異(p<0.05)。
　　 1.2不同組別之間的空腹胰島素水平比較
　　 六組大鼠的空腹胰島素水平在入組前(即0月時)無明顯差異(p>0.05)。
　　 普通飼料喂養(yǎng)的三組[即(S+C),(O+C

23、)或(O+E+C)]中,任何一組的空腹胰島素水平均在整個研究期間均較0月無顯著變化(p>0.05),三組之間也無明顯差異(p>0.05)。
　　 高脂高糖飼料喂養(yǎng)的三組[即(S+FS),(O+FS)或(O+E+FS)]出現(xiàn)如下變化:(1)和自身入組前(即和自身0月)比較,空腹胰島素水平持續(xù)上升,且從第2個月起即有顯著性差異(p<0.05)；(2)和普通飼料喂養(yǎng)的三組[即(S+C),(O+C)或(O+E+C)]中任意一組比較,從第

24、1個月起,即有升高,但是在第1和第2個月無顯著性差異(p>0.05),在第3和第4個月有顯著升高(p<0.05)；(3)在高脂高糖飼料喂養(yǎng)的三組之間進行兩兩比較,(O+FS)和(S+FS)或(O+FS)和(S+E+FS)進行比較,(O+FS)組的空腹胰島素水平從第1個月起即較高,但是在第1和第2個月,這種差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05),在第3和第4個月,則顯示出顯著性差異(p<0.05)。(S+FS)和(O+E+FS)比較,則在整個研

25、究過程中未顯示出差異(p>0.05)
　　 1.3不同組別之間胰島素敏感指數(shù)的比較
　　 六組大鼠在入組前(即0月時)胰島素敏感指數(shù)無明顯差異(p>0.05)。
　　 普通飼料喂養(yǎng)的三組[即(S+C),(O+C)或(O+E+C)]中,任意一組的胰島素敏感指數(shù)在整個研究期間均較0月無顯著變化(p>0.05),三組彼此之間也無明顯差異(p>0.05)。
　　 高脂高糖飼料喂養(yǎng)的三組[即(S+FS),(O+FS

26、)或(O+E+FS)]出現(xiàn)如下變化:(1)和自身入組前(即和自身0月)比較,胰島素敏感指數(shù)持續(xù)下降,至第2個月,(O+FS)組的胰島素敏感指數(shù)明顯低于自身0月的水平(p<0.05),第3和第4個月,則三組的胰島素敏感指數(shù)均顯著低于自身0月水平,且這種差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)；(2)和普通飼料喂養(yǎng)[即(S+C),(O+C)或(O+E+C)]中任意一組相比,高脂高糖飼料喂養(yǎng)的任意一組從第1個月起胰島素敏感指數(shù)即低于普通飼料喂養(yǎng)的任意

27、一組；在第2和第3個月,(O+FS)組和普通飼料喂養(yǎng)的任何一組之間的差異即有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05),此時(S+FS)或(O+E+FS)中的任何一組和普通飼料喂養(yǎng)的任意一組相比差異還沒有顯著性(p>0.05)；在第4個月,高脂高糖飼料喂養(yǎng)的任意一組和普通飼料喂養(yǎng)的任意一組比較,均有顯著性降低(p<0.05)；(3)高脂高糖飲食的三組之間進行兩兩比較,(O+FS)和(S+FS)或(O+FS)和(O+E+FS)相比胰島素敏感指數(shù)降低,在第

28、4個月這種差異顯示出顯著性差異(p<0.05),(S+FS)和(O+E+FS)相比,在整個研究期間未見有明顯差異(p>0.05)。
　　 1.4不同組別之間的糖化血紅蛋白比較
　　 六組大鼠的糖化血紅蛋白在入組前(即0月時)無明顯差異(p>0.05)。
　　 喂養(yǎng)4個月后復(fù)查GHbAlc。六組之間也沒有顯著性差異(p>0.05)。
　　 1.5不同組別之間骨骼肌中的Caveolin-3蛋白表達(dá)含量比較

29、r>　　 以(S+C)組作為對照進行感光密度分析。
　　 各組之間在基礎(chǔ)水平無明顯差異(p>0.05)。
　　 經(jīng)過4個月喂養(yǎng),在普通飼料喂養(yǎng)的三組中,(O+C)或(O+E+C),Caveolin-3蛋白含量和(S+C)(即對照組)相比無明顯差異(p>0.05)。在高脂高糖飲食喂養(yǎng)的三組[即(S+FS),(O+FS)或(O+E+FS)]中,任何一組和(S+C)組比較均有顯著下降,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。(S

30、+FS),(O+FS)和(O+E+FS)三組之間進行兩兩比較:(O+FS)和(S+FS)或(O+FS)和(O+E+FS)比較,Caveolin-3蛋白含量明顯下降,且有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05)。(S+FS)和(O+E+FS)比較則無顯著性差異(p>0.05)。
　　 小結(jié):
　　 (1)雌激素能夠降低高脂高糖飼料喂養(yǎng)大鼠的空腹血糖和空腹胰島素,升高胰島素敏感指數(shù)。
　　 (2)大鼠中骨骼肌細(xì)胞上caveolin

31、的變化情況和整體糖代謝的變化相似,提示兩者可能存在一定的相關(guān)關(guān)系。
　　 第二章雌激素對骨骼肌細(xì)胞糖消耗和糖轉(zhuǎn)運的影響及Caveolin-3在其中的可能作用
　　 本部分我們培養(yǎng)骨骼肌細(xì)胞,先做出雌激素的劑量效應(yīng)關(guān)系,接著做雌激素的時間效應(yīng)關(guān)系,然后給予骨骼肌細(xì)胞以不同的干預(yù),用放射同位素法檢測骨骼肌細(xì)胞的糖消耗和糖轉(zhuǎn)運,了解雌激素、他莫昔芬(Tamoxifen)和β-MCD單獨或聯(lián)合使用對骨骼肌細(xì)胞糖代謝中糖轉(zhuǎn)運和糖消

32、耗的影響,探討雌激素對骨骼肌細(xì)胞糖代謝的影響以及可能的機制,了解caveolae在其中的可能作用。
　　 選取Wistar新生乳鼠培養(yǎng)骨骼肌細(xì)胞。用葡萄糖氧化酶法測定培養(yǎng)液中葡萄糖的殘存量,計算出骨骼肌細(xì)胞的葡萄糖消耗量。用2-脫氧-[3H]-D-葡萄糖法測定骨骼肌細(xì)胞的葡萄糖轉(zhuǎn)運量。
　　 雌激素的濃度效應(yīng)關(guān)系:10-5～10-10mol/L的17β-雌二醇會使得骨骼肌細(xì)胞的糖消耗和糖轉(zhuǎn)運增加,以濃度為10-8mol/

33、L時作用最明顯。
　　 雌激素的時間效應(yīng)關(guān)系:10-8mol/L濃度的雌激素在(0min～48hr)對骨骼肌細(xì)胞糖消耗和糖轉(zhuǎn)運有顯著增強作用,這種作用在5min即可以觀察到,在15min達(dá)高峰,至少可持續(xù)48小時。
　　 對骨骼肌細(xì)胞進行分組實驗,將培養(yǎng)的骨骼肌細(xì)胞分為6組,分別為:空白對照組(C)、雌激素處理組(E)、雌激素+他莫昔芬組(E+Ta)、雌激素+β-MCD組(E+β)、他莫昔芬處理組(Ta)、β-MCD處理

34、組(β)。發(fā)現(xiàn)E組較C組,骨骼肌細(xì)胞的糖消耗和糖轉(zhuǎn)運(3200±280 vs1000±100,4300±360 vs1000±100)均明顯增加(p<0.05)；(E+Ta)組骨骼肌細(xì)胞的糖消耗和糖轉(zhuǎn)運較C(1800±150 vs1000±100,2100±180 vs1000±100)增加(p<0.05),與E組比較(1800±150 vs3200±280,2100±180 vs4300±360)則明顯下降(p<0.05)；(E+β)

35、組骨骼肌細(xì)胞的糖消耗和糖轉(zhuǎn)運較C組(2000±200 vs1000±100,2200±210 vs1000±100)增加(p<0.05),與E組比較(2000±200 vs3200±280,2200±210 vs4300±360)則明顯下降(p<0.05)；Ta組骨骼肌細(xì)胞的糖消耗和糖轉(zhuǎn)運與空白對照組相比(1000±150 vs1000±100,980±100 VS1000±100)無明顯變化(p>0.05),β組骨骼肌細(xì)胞的糖消耗和糖

36、轉(zhuǎn)運較C組(600±100 vs100±1000,700±120 Vs1000±100)明顯減弱(p<0.05)。
　　 小結(jié):
　　 (1)雌激素在濃度為10-5mol/L～10-10mol/L能顯著增加骨骼肌細(xì)胞的糖消耗和糖轉(zhuǎn)運,其中接近生理劑量時(10-8mol/L)效果最明顯。雌激素的這種效應(yīng)可以被他莫昔芬或β-MCD阻斷。
　　 (2)雌激素改善骨骼肌細(xì)胞糖代謝的作用可能是通過細(xì)胞膜上的caveolae

37、來實現(xiàn)的,也必須有雌激素受體的參與。
　　 第三章雌激素受體、葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白-4和Caveolin-3在骨骼肌細(xì)胞中的關(guān)系
　　 在本部分采用免疫共沉淀的方法,了解ER、GLUT4和caveolin-3之間的關(guān)系,從而探討雌激素對于糖代謝影響的可能機制以及caveolae在其中的作用。
　　 選取Wistar新生乳鼠培養(yǎng)骨骼肌細(xì)胞,對ER、GLUT4和caveolin-3兩兩進行免疫共沉淀。結(jié)果顯示在骨骼肌細(xì)胞中

38、GLUT4和caveolin-3免疫共沉淀呈陽性,ER和caveolin-3以及ER和GLUT4均呈陰性。
　　 小結(jié):
　　 (1)雌激素對于骨骼肌細(xì)胞糖代謝的影響可能是通過和受體結(jié)合的非基因途徑,在這條非基因途徑上,caveolin可能起著一定的作用；
　　 (2)在骨骼肌細(xì)胞GLUT-4可能位于或富集于細(xì)胞膜表面的caveolae。
　　 (3)ER和GLUT4可能不存在直接的連接或作用。
　

39、　 結(jié)論:
　　 (1)接近生理劑量的雌激素能夠降低高脂高糖飼料喂養(yǎng)大鼠的空腹血糖、空腹胰島素,升高胰島素敏感指數(shù)。
　　 (2)雌激素對于大鼠糖代謝的改善作用是通過增加大鼠骨骼肌細(xì)胞的糖消耗和糖轉(zhuǎn)運而實現(xiàn)的,他莫昔芬和β-MCD均可以有效阻斷雌激素對于骨骼肌細(xì)胞糖消耗和糖轉(zhuǎn)運的這種增強作用。
　　 (3)雌激素增加骨骼肌細(xì)胞糖消耗和糖轉(zhuǎn)運的這種效應(yīng)可能是一種需要雌激素受體參與的,和caveolin相關(guān)的非基因