MicroRNA-150在房顫及急性心梗中的表達(dá)及機(jī)制研究.pdf

1、近幾年，microRNA（miRNA）在心血管生理及疾病機(jī)制中的研究獲得了重大的進(jìn)步，非編碼RNA在生物學(xué)機(jī)理過(guò)程中的重要作用目前已經(jīng)取得共識(shí)，而miRNAs就是其中的一類，其大約只有22個(gè)堿基的RNA序列，通過(guò)部分互補(bǔ)結(jié)合信使RNA上的靶位點(diǎn)，調(diào)控蛋白的合成。在心血管系統(tǒng)中，miRNAs已經(jīng)被證實(shí)起著重要的作用，它幾乎參與所有和心血管系統(tǒng)相關(guān)細(xì)胞的功能調(diào)控，例如內(nèi)皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞，炎癥細(xì)胞和成纖維細(xì)胞，因此，miRNAs直

2、接參與了很多心血管疾病的病理發(fā)展?；谒鼈?cè)诩膊≈械淖饔茫芯克鼈儗?duì)于疾病的診斷、預(yù)防和治療都成為了目前的熱點(diǎn)，然而要使它們進(jìn)入臨床現(xiàn)在還需要克服許多的困難，本課題主要探討miRNAs在心血管疾病中的診斷以及作用機(jī)制。
　　一、血漿中降低的miRNA-150作為潛在診斷房顫的新指標(biāo)
　　1、基因篩查并驗(yàn)證miRNA-150在房顫病人血漿中表達(dá)降低
　　本課題分別收集5例孤立性陣發(fā)性房顫（PAF）病人血漿、5例孤立性永久

3、性房顫（PersAF）病人血漿和5例正常對(duì)照組，運(yùn)用深度測(cè)序技術(shù)篩查出22個(gè)miRNAs表達(dá)異常，其中miRNA-146a、miRNA-150、miRNA-19a和 miRNA-375符合標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步驗(yàn)證。同時(shí)收集90例獨(dú)立血漿標(biāo)本運(yùn)用探針PCR技術(shù)驗(yàn)證這4個(gè)miRNAs，發(fā)現(xiàn)只有miRNA-150的表達(dá)趨勢(shì)符合篩查結(jié)果，其表達(dá)分別在PersAF病人血漿中及PAF病人血漿中相對(duì)于正常對(duì)照組下降約17倍和20倍。
　　2、下調(diào)的miR

4、NA-150表達(dá)與房顫相關(guān)聯(lián)
　　結(jié)合病人資料和測(cè)得的miRNA-150表達(dá)值，邏輯回歸分析顯示，降低的miRNA-150表達(dá)（優(yōu)勢(shì)比OR1.96，95％可信區(qū)間CI1.5~3.57，P<0.001）、年齡（OR1.1，95％CI1.36~2.73，P<0.001）和左房直徑（LAD）(OR1.5，95％CI1.36~1.8，P<0.001)分別為房顫的獨(dú)立相關(guān)因素。數(shù)據(jù)庫(kù)分析顯示miRNA-150的靶基因中有18個(gè)基因與AF相關(guān)

5、，其中11個(gè)與炎癥系統(tǒng)有聯(lián)系，炎癥因子不僅可以作為診斷AF的標(biāo)準(zhǔn)，也參與了AF的發(fā)病機(jī)理，為此我們探測(cè)了病人血漿中C-反應(yīng)蛋白（CPR）的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)其與miRNA-150的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（相關(guān)系數(shù)0.77）。
　　二、miRNA-150在急性心肌梗死（AMI）中調(diào)控單核細(xì)胞功能保護(hù)心肌功能
　　1、miRNA-150在AMI后的外周單核細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)
　　收集20例AMI病人外周血和10例正常對(duì)照組，磁珠分選出外周血

6、CD14+單核細(xì)胞，qRT-PCR測(cè)試發(fā)現(xiàn)miRNA-150表達(dá)量下調(diào)，而在CD14-的外周單核細(xì)胞（PBMCs）中表達(dá)無(wú)顯著差異。同時(shí)建立小鼠心梗模型，從心梗小鼠和對(duì)照組中的PBMCs中磁珠分選出CD115+單核細(xì)胞，相對(duì)于對(duì)照組，心梗后單核細(xì)胞中的miRNA-150表達(dá)顯著下調(diào)，而在CD115-PBMCs中表達(dá)無(wú)差異。
　　2、miRNA-150調(diào)控人類單核細(xì)胞（THP-1）的遷移和炎癥因子的產(chǎn)生
　　體外實(shí)驗(yàn)在THP-

7、1細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染miRNA-150的擬合物（agomiRNA-150）、抑制劑（antagomiRNA-150）和對(duì)照物，遷移實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)高表達(dá)組相對(duì)對(duì)照組阻止了THP-1的遷移（3.7±0.5倍），而抑制miRNA-150組促進(jìn)了遷移（6.3±0.8倍）。另外，轉(zhuǎn)然后的THP-1給予脂多糖（LPS）刺激，ELLSA測(cè)試發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于對(duì)照組高表達(dá)miRNA-150組減少了促炎因子的產(chǎn)生，增加了白介素-10（IL-10）的表達(dá)；抑制miRNA-1

8、50組得到了相反的結(jié)果。
　　3、上調(diào)單核細(xì)胞中miRNA-150的表達(dá)保護(hù)AMI后的心肌功能
　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示在外周細(xì)胞高表達(dá)miRNA-150的心梗小鼠模型中，相對(duì)于對(duì)照組小鼠改善了心臟功能，減少了心梗的面積，阻止了心肌細(xì)胞的凋亡，并且降低了炎癥單核細(xì)胞Ly-6Chigh的聚集；而在移植了miRNA-150敲除鼠骨髓的小鼠心梗模型中，這些保護(hù)效應(yīng)則被消除。
　　4、miRNA-150調(diào)控趨化因子受體4（CXCR4）

9、的表達(dá)
　　數(shù)據(jù)庫(kù)分析得出CXCR4為miRNA-150的靶基因，體外實(shí)驗(yàn)在THP-1細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染agomiRNA-150和對(duì)照擬合物，WESTERN實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CXCR4表達(dá)相對(duì)于對(duì)照組下調(diào)；在高表達(dá)miRNA-150的小鼠中，分離CD115+單核細(xì)胞，同樣發(fā)現(xiàn)CXCR4表達(dá)相對(duì)于對(duì)照組下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　1、血漿中降低的miRNA-150可以作為潛在診斷房顫的新指標(biāo)；
　　2、miRNA-150調(diào)控單核細(xì)胞