羊急性心梗卸負荷模型的miRNA表達譜.pdf

1、目的:
　　心肌細胞因缺乏再生能力，遇到缺血缺氧等多種原因?qū)е滦募〖毎麚p傷，造成心肌細胞丟失、纖維組織增生，引發(fā)心室重構(gòu)，并逐漸進展成心力衰竭。左心室循環(huán)輔助裝置(LVAD)已經(jīng)被證明是治療心力衰竭的有效手段，使用LVAD進行機械循環(huán)支持可以通過對衰竭的左心室卸負荷的方式帶來有利的影響。然而，LVAD在急性心肌梗死治療的應用還需進一步研究論證，LVAD對AMI后期的預后及其機制有待進一步闡明。
　　微小RNA(miRNA，

2、miRNA)是一種21-23個堿基組成的內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA，可在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達。MiRNA參與多種病理生理學過程。目前miRNAs在心肌缺血中的功能與機制研究尚處于起步階段，尤其是有關(guān)心肌缺血早期miRNAs改變的報道較少。也沒有在AMI早期采取LVAD干預后，對心肌細胞內(nèi)部miRNA的分析，及其相關(guān)信號通路的研究。本文試圖在羊急性心梗模型上建立miRNA表達譜，為LVAD治療急性心梗提供理論依據(jù)。
　　方法:

3、
　　1、成年小尾寒羊經(jīng)結(jié)扎冠狀動脈制作心梗模型，心臟不停跳植入FW-2型軸流泵，分別為對照組和卸負荷組。
　　2、模型建立后，進行心電圖檢測，同時置入Swan-gaze漂浮導管進行檢測記錄。
　　3、72小時后，分別取對照組和卸負荷組的心肌組織，分為正常區(qū)域，梗死邊帶區(qū)域以及梗死區(qū)域，進行組織染色法。
　　4、TUNEL法檢測心肌細胞的凋亡情況。
　　5、高通量測序技術(shù)建立miRNA表達譜。
　　6

4、、比較對照組和卸負荷組相應區(qū)域心肌中差異表達的miRNA。
　　7、PCR對測序結(jié)果進行驗證。
　　8、驗證后對差異表達的miRNA進行功能和信號通路分析。
　　結(jié)果:
　　1、對照組動物實驗共進行7只，其中3只造模成功。LVAD組動物實驗共有5只，其中3只成功。
　　2、HE染色結(jié)果顯示與對照組相比，卸負荷組心肌細胞破壞減弱，同時炎癥細胞浸潤明顯減少。Masson染色結(jié)果顯示卸負荷組膠原化面積減小，心肌細

5、胞保留較多。天狼猩紅染色結(jié)果顯示卸負荷組膠原化明顯減輕;對比梗死區(qū)域，卸負荷后主要是Ⅲ型膠原，而對照組則主要是Ⅰ型膠原。
　　3、TUNEL結(jié)果顯示心梗卸負荷后，心肌細胞凋亡明顯減弱。
　　4、卸負荷組與對照組相比，心梗區(qū)域差異表達的miRNA是oar-miR-19b（上調(diào)）;梗死邊帶區(qū)域差異表達的miRNA有3個，其中下調(diào)的是oar-miR411b-5p和oar-miR-487a-5p，上調(diào)的是oar-miR-26a。

6、r>　　5、PCR驗證結(jié)果顯示oar-miR-19b(P＜0.05)和oar-miR-26a(P＜0.01)在卸負荷組與對照組中表達有明顯差異，與芯片結(jié)果相符。
　　6、GO和KEGG分析結(jié)果顯示oar-miR-19b和oar-miR-26a所涉及到的功能和信號通路均與心血管疾病有密切的關(guān)系。
　　結(jié)論:
　　本實驗利用FW-2型軸流泵成功地對急性心梗的羊進行了3天的循環(huán)輔助，證實LVAD可有效減輕心梗程度。成功地建立