人bFGF的克隆及其對HeLa細(xì)胞生長和血管生成素表達(dá)的影響.pdf

1、宮頸癌是世界女性第二大惡性腫瘤。已經(jīng)有實(shí)驗(yàn)證實(shí)血管新生與宮頸癌患者預(yù)后不良有關(guān)。有多個血管生成因子參與腫瘤血管發(fā)生過程，其中主要的有VEGF、bFGF和血管生成素。 bFGF是可以與肝素結(jié)合的多功能多肽家族的成員之一。它具有促血管生成的作用，它也在多種腫瘤的增殖和分化中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)多種惡性腫瘤都高表達(dá)bFGF。有學(xué)者研究顯示宮頸癌患者的血清中bFGF含量增高。血管生成素是唯一一個以促血管發(fā)生的功能而命名的血管生成因子

2、。血管生成素在內(nèi)皮細(xì)胞可以發(fā)生核轉(zhuǎn)移，進(jìn)而促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。血管生成素在HeLa細(xì)胞中也有核轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，并且能夠在細(xì)胞核內(nèi)促進(jìn)rRNA的合成。 目前對于bFGF和血管生成素的研究主要集中在其如何誘發(fā)腫瘤的血管發(fā)生，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的進(jìn)一步生長和惡化，以及它們在腫瘤預(yù)后評價中的相關(guān)作用。而對于二者的關(guān)系的研究比較少。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用血管生成素的反義核苷酸可以抑制體外培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞和體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞的生長，但是細(xì)胞和腫瘤內(nèi)的bFGF表

3、達(dá)增加。本實(shí)驗(yàn)室前期的研究發(fā)現(xiàn)，在轉(zhuǎn)染血管生成素反義核苷酸的黑色素瘤細(xì)胞中，bFGF的表達(dá)增加，而在轉(zhuǎn)染血管生成素正義核苷酸的黑色素瘤細(xì)胞中，bFGF的表達(dá)降低。為了進(jìn)一步的研究bFGF與血管生成素的關(guān)系，我們克隆了人bFGF基因，并且構(gòu)建了含有人bFGF基因的正義和反義的真核表達(dá)載體，建立了穩(wěn)定表達(dá)bFGF的細(xì)胞株。進(jìn)而探討在HeLa細(xì)胞中，利用bFGF基因的轉(zhuǎn)染改變細(xì)胞內(nèi)源的bFGF基因的表達(dá)水平對血管生成素表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示

4、，在轉(zhuǎn)染反義bFGF基因的bFGF低表達(dá)細(xì)胞株中，細(xì)胞表達(dá)的bFGF的mRNA和蛋白都降低，細(xì)胞的增殖受到了抑制，但是血管生成素的蛋白表達(dá)水平卻提高了。相反，在轉(zhuǎn)染正義bFGF基因的bFGF高表達(dá)的細(xì)胞株中，細(xì)胞表達(dá)的bFGF的mRNA和蛋白均增加，同時細(xì)胞的增殖增加，然而血管生成素的的蛋白表達(dá)水平下降了。但是，高表達(dá)和低表達(dá)bFGF的細(xì)胞的血管生成素的mRNA水平無顯著性差異。對HeLa細(xì)胞及高表達(dá)bFGF和低表達(dá)bFGF的細(xì)胞，施加