溫氏附紅細(xì)胞體體外培養(yǎng)、藥物篩選及疾病治療的試驗(yàn)研究.pdf

1、在RPMI-1640、DMEM、M199、HL四種培養(yǎng)基中分別添加不同比例的新生牛血清、葡萄糖和NaHCO<,3>進(jìn)行牛溫氏附紅細(xì)胞體的體外培養(yǎng)效果的比較，以確定最佳培養(yǎng)基和新生牛血清、葡萄糖、NaHCO<,3>的添加比例，并依照確定的培養(yǎng)條件進(jìn)行溫氏附紅細(xì)胞體體外傳代培養(yǎng)和溫氏附紅細(xì)胞體體外感染人、兔、山羊和豬紅細(xì)胞的試驗(yàn)研究；利用體外培養(yǎng)確定的條件，進(jìn)行了咪唑苯脲、磷酸伯氨喹、鹽酸土霉素、四環(huán)素等15種藥物的體外藥物殺滅試驗(yàn)，經(jīng)綜合

2、評價(jià)從中選擇2種體外殺滅效果最好的藥物，進(jìn)行牛溫氏附紅細(xì)胞體病治療試驗(yàn)，通過治療前后臨床常規(guī)檢查、血液涂片鏡檢、血液生理生化指標(biāo)測定結(jié)果的綜合比較，確定治療牛溫氏附紅細(xì)胞體病的首選藥物。 研究結(jié)果表明：RPMI-1640培養(yǎng)液中添加30％新生牛血清、2.0％葡萄糖、0.20％NaHCO<,3>或在HL培養(yǎng)液中添加20％新生牛血清和1％HEPES，在37℃、5％CO<,2>的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，每12h更換一次培養(yǎng)液，作原代體外培養(yǎng)，

3、二者均能夠取得較高的感染率，且紅細(xì)胞表面附紅細(xì)胞體數(shù)量也較多，統(tǒng)計(jì)學(xué)無顯著差異，但因HL培養(yǎng)基和。HEPES價(jià)格較高，考慮成本等因素，所以首選RPMI-1640作為培養(yǎng)液。 奶牛溫氏附紅細(xì)胞體體外傳代培養(yǎng)，當(dāng)紅細(xì)胞感染率達(dá)80％以上時(shí)則收集該孔內(nèi)紅細(xì)胞，留約2ul紅細(xì)胞泥，并補(bǔ)充18ul正常牛紅細(xì)胞和完全培養(yǎng)液至200gl混勻，使其紅細(xì)胞感染率保持在7％～9％左右，按原代培養(yǎng)條件進(jìn)行體外傳代培養(yǎng)，可連續(xù)傳代20代。 人、

4、兔、山羊和豬紅細(xì)胞在體外培養(yǎng)試驗(yàn)中均能被溫氏附紅細(xì)胞體所感染，說明奶牛溫氏附紅細(xì)胞體沒有嚴(yán)格的特定宿主，并且兔紅細(xì)胞對牛溫氏附紅細(xì)胞體有更高的易感性。 通過溫氏附紅細(xì)胞體體外藥物殺滅試驗(yàn)證明，咪唑苯脲、磷酸伯氨喹體外殺滅效果最好，且在有效濃度范圍內(nèi)對紅細(xì)胞的影響較輕微；敵百蟲、依沙吖啶殺滅效果也很好，但是對紅細(xì)胞的損傷較咪唑苯脲和磷酸伯氨喹重，因此治療奶牛溫氏附紅細(xì)胞體應(yīng)首選咪唑苯脲或磷酸伯氨喹，其次為敵百蟲和依沙吖啶。