左奧硝唑氯化鈉注射液兩種給藥方案的臨床藥物代謝動(dòng)力學(xué)及藥動(dòng)學(xué)-藥效學(xué)研究.pdf

1、左奧硝唑是5-硝基咪唑類藥物奧硝唑的左旋體，它在體內(nèi)主要以具有細(xì)胞毒作用的原藥和具有細(xì)胞毒作用的中間產(chǎn)物作用于細(xì)菌的DNA，使其螺旋結(jié)構(gòu)斷裂或阻斷其轉(zhuǎn)錄復(fù)制而致其死亡達(dá)到抗菌目的。左奧硝唑具有良好的抗厭氧菌作用，其抗菌活性與奧硝唑基本相似，對(duì)脆弱擬桿菌、多形擬桿菌、消化球菌和消化鏈球菌、梭桿菌、牙齦類桿菌等厭氧菌均有較好的抗菌活性。左奧硝唑的中樞神經(jīng)毒性明顯低于奧硝唑，其中右奧硝唑是引起奧硝唑中樞神經(jīng)毒性的主要原因。
　　左奧硝唑

2、的Ⅰ期臨床耐受性試驗(yàn)表明左奧硝唑單次給藥劑量在500-1500mg內(nèi)較安全。健康受試者每次0.5g，每日兩次連續(xù)5日靜脈滴注左奧硝唑氯化鈉注射液，結(jié)果顯示左奧硝唑在體內(nèi)存在一定的蓄積。左奧硝唑的初步PK分析顯示若將給藥方案由500mg，q12h改為750mg，q24h后，其體內(nèi)積蓄因子可從1.93降低至1.3。上述結(jié)果結(jié)合左奧硝唑?qū)捬蹙腗IC結(jié)果建議本品目前500mg，q12h的給藥方案可改為750mg，q24h。但此僅為初步研究結(jié)

3、果，尚需進(jìn)一步的臨床驗(yàn)證。
　　左奧硝唑目前的藥動(dòng)學(xué)研究尚沒有進(jìn)行左奧硝唑代謝產(chǎn)物和左奧硝唑尿排泄的研究，同時(shí)缺乏PK/PD研究結(jié)果。奧硝唑在人體尿液中的Ⅰ相代謝產(chǎn)物有5個(gè)，M1（1-氯-3-（2-羥甲基-5-硝基-1-咪唑基）-2-丙醇）和M2（2-甲基-5-硝基咪唑）均由奧硝唑氧化得到， M4（3-（2-甲基-5-硝基-1-咪唑基）-1，2-丙二醇）由奧硝唑咪唑環(huán)側(cè)鏈氯的水解得到，M3（N-（3-氯-2-羥丙基）乙酰胺）和M5

4、（乙酰胺）由奧硝水解后咪唑環(huán)裂解得到。南京圣和藥業(yè)有限公司已研制出奧硝唑的這5個(gè)代謝產(chǎn)物，本研究將補(bǔ)充左奧硝唑代謝產(chǎn)物在人體內(nèi)的PK研究，同時(shí)進(jìn)行左奧硝唑原藥及其代謝產(chǎn)物在尿液中的排泄研究，以研究左奧硝唑在體內(nèi)的物料平衡。
　　本研究將開展左奧硝唑氯化鈉注射液兩種給藥方案500mg，q12h和750mg，q24h在健康受試者體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究，比較兩種給藥方案的PK特征和安全性，并進(jìn)行PK/PD研究，優(yōu)化給藥方案，為Ⅳ臨床試

5、驗(yàn)給藥方案的制定提供依據(jù);同時(shí)進(jìn)行左奧硝唑代謝產(chǎn)物在人體內(nèi)PK過程的研究。
　　本研究包括以下三個(gè)部分:
　　第一部分同時(shí)檢測(cè)血漿、尿液中左奧硝唑及其代謝產(chǎn)物濃度的LC-MS/MS檢測(cè)方法的建立及驗(yàn)證
　　本部分建立了同時(shí)測(cè)定血漿及尿液中左奧硝唑及其代謝產(chǎn)物M1、M2和M4藥物濃度的LC-MS/MS方法(M3和M5采用本方法的檢測(cè)效果不理想)。采用WatersUPLC超高效液相色譜儀和API4000 QTRAP質(zhì)譜儀（

6、AB SCIEX公司）。固定相為:ACQUITY CSH C18色譜柱(2.1 mm×50 mm;1.7μm);檢測(cè)血漿和尿液樣本的流動(dòng)相均為乙腈:0.1％甲酸溶液梯度洗脫。以直接蛋白沉淀法和液-液萃取法預(yù)處理血漿與尿液樣本，內(nèi)標(biāo)為甲硝唑。APCI源正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)，左奧硝唑檢測(cè)通道:m/z220.0→127.5，M1檢測(cè)通道:m/z236.2→170.9，M2檢測(cè)通道:m/z127.9→110.7，M4檢測(cè)通道:m/z202

7、.5→127.7，內(nèi)標(biāo)檢測(cè)通道:m/z172.1→127.8。
　　該方法測(cè)定血漿和尿液中的左奧硝唑的線性范圍均為(0.0100-5.00)μg/mL，定量下限均為0.0100μg/mL; M1的線性范圍均為(0.00500-2.50)μg/mL，定量下限均為0.00500μg/mL; M2的線性范圍均為(0.0200-10.0)μg/mL，定量下限均為0.0200μg/mL;M4的線性范圍均為(0.00250-1.25)μg/m

8、L，定量下限均為0.00250μg/mL?？瞻籽獫{和尿液對(duì)左奧硝唑、M1、M2和M4的基質(zhì)效應(yīng)因子分別為96.3±8.9％和106.1±2.2％、114.1±2.1％和98.1±2.0％、92.7±3.0％和101.9±3.0％、98.8±5.2％和102.1±1.9％。血漿溶液和尿液溶液中，左奧硝唑、M1、M2和M4的提取回收率分別為104.5±3.5％和108.3±8.2％、97.7±4.4％和104.7±4.5％、105.4±3.

9、9％和112.0±6.9％、91.3±3.5％和87.7±5.9％。左奧硝唑血漿和尿液的日內(nèi)重現(xiàn)性RSD分別為≤5.1％和≤10.8％，回收率分別為(91.1～105.1)％和(98.1～100.9)％;日間測(cè)定結(jié)果RSD分別為≤9.3％和≤6.4％，回收率分別為(96.2～101.2)％和(92.8～105.6)％。M1的日內(nèi)重現(xiàn)性RSD分別為≤8.7％和≤8.2％，回收率分別為(95.8～103.8)％和(96.9～107.9)％;

10、日間測(cè)定結(jié)果RSD分別為≤8.6％和≤7.1％，回收率分別為(104.2～105.7)％和(99.1～109.2)％。M2的日內(nèi)重現(xiàn)性RSD分別為≤12.2％和≤5.8％，回收率分別為(87.8～96.8)％和(95.1～102.7)％;日間測(cè)定結(jié)果RSD分別為≤9.7％和≤9.4％，回收率分別為(91.5～103.2)％和(95.9～104.0)％。M4的日內(nèi)重現(xiàn)性RSD分別為≤8.9％和≤8.1％，回收率分別為(96.8～100.6

11、)％和(103.7～105.9)％;日間測(cè)定結(jié)果RSD分別為≤7.2％和≤7.0％，回收率分別為(96.5～103.2)％和(97.9～105.5)％。左奧硝唑和代謝產(chǎn)物M1、M2、M4儲(chǔ)備液及內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液-40±5℃放置5個(gè)月穩(wěn)定。左奧硝唑和代謝產(chǎn)物M1、M2、M4血漿及尿溶液高、中、低及LLOQ濃度質(zhì)控樣本室溫放置24h穩(wěn)定，預(yù)處理后放置48h穩(wěn)定，-40±5℃冰箱凍融3次前后濃度基本相同;上述血漿質(zhì)控樣本-40±5℃長(zhǎng)期放置至3個(gè)月

12、穩(wěn)定，尿液樣本-40±5℃長(zhǎng)期放置至4個(gè)月穩(wěn)定。左奧硝唑血漿樣本10倍稀釋后回收率為110.5±4.1％，尿液樣本10和100倍稀釋后回收率分別為103.5±1.8％和98.2±3.6％; M1血漿樣本的回收率為103.7±6.8％，尿液樣本的回收率分別為118.9±5.1％和101.2±3.2％。M2血漿樣本的回收率為104.9±4.1％，尿液樣本10倍稀釋后的回收率為93.9±3.4％。M4血漿樣本的回收率為106.8±1.3％，尿

13、液樣本的回收率分別為111.0±2.1％和97.6±1.8％。
　　本實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)測(cè)定血、尿樣本中左奧硝唑及其代謝產(chǎn)物M1、M2和M4濃度的LC-MS/MS分析方法，該測(cè)定方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高，可用于該藥藥動(dòng)學(xué)研究中生物樣本的檢測(cè)。
　　第二部分健康中國受試者單劑和多劑靜脈滴注左奧硝唑氯化鈉注射液500mg，q12h和750mg，qd的耐受性和藥代動(dòng)力學(xué)研究
　　本研究為單中心、開放、平行給藥試驗(yàn)設(shè)計(jì)，評(píng)價(jià)健康中

14、國受試者單次和多次連續(xù)靜脈滴注左奧硝唑氯化鈉注射液500 mg和750mg的藥動(dòng)學(xué)特征和安全性。
　　共入組24例中國健康受試者（男女各半），隨機(jī)分為500mg劑量組和750mg劑量組。兩組受試者均在第1日單次給予左奧硝唑氯化鈉注射液（首劑），按時(shí)留取72h內(nèi)的血、尿樣本，進(jìn)行單劑藥動(dòng)學(xué)研究;第4-10日連續(xù)多次給藥（共7日），第11日單次給予左奧硝唑氯化鈉注射液（末劑），期間按時(shí)留取血、尿樣本，并觀察其安全性，進(jìn)行左奧硝唑的多劑

15、藥動(dòng)學(xué)研究;整個(gè)試驗(yàn)周期為14日。所有血、尿樣本采用LC-MS/MS方法測(cè)定左奧硝唑原藥及其代謝產(chǎn)物M1、M2和M4的濃度。采用Phoenix WinNonlin6.0軟件以非房室模型和房室模型計(jì)算原藥PK參數(shù)，并計(jì)算首劑和末劑給藥后0～72h內(nèi)各時(shí)間段尿排出量和累積尿排出率，同時(shí)計(jì)算主要代謝產(chǎn)物在血漿和尿液中的含量及比例。
　　結(jié)果:①受試者單次靜脈滴注500mg左奧硝唑，左奧硝唑的Cmax為12.5±3.4μ g/mL，AUC

16、0-72h為174±40μg·h/mL，t1/2為11.6±0.8h，代謝物M1和M4的Cmax分別為0.118±0.043μg/mL和0.131±0.027μg/mL，代謝比率MR分別為2.12±0.53％和2.57±0.13％;左奧硝唑、M1、M2和M4的累計(jì)尿排出率Ae0-24h分別為7.62±1.91％、0.702±0.172％、0.117±0.072％和1.72±0.18％。受試者單次靜脈滴注750mg左奧硝唑氯化鈉注射液，左

17、奧硝唑的Cmax為17.3±2.2μg/mL，AUC0-72h為262±48μg·h/mL，t1/2為11.9±1.3h，M1和M4的Cmax分別為0.150±0.060μg/mL和0.184±0.030μg/mL，MR分別為1.67±0.47％和2.45±0.38％;左奧硝唑、M1、M2和M4的累計(jì)尿排出率Ae0-24h分別為7.54±3.08％、0.717±0.352％、0.080±0.030％和1.32±0.75％。兩劑量組代謝物

18、M2在血漿中的濃度均低于檢測(cè)限(0.0200μg/mL)。②左奧硝唑多次給藥后，750mg組的Cmax_ss和AUC0-∞與500mg組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而Cmin_ss比500mg組降低了44.8％，CLss比500mg組增加了38.6％，Vss比500mg組增加了42.5％，蓄積比AR是500mg組的64.0％，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)果顯示與500mg，q12h給藥方案相比，750mg，qd給藥可以減少左奧硝唑在

19、體內(nèi)的蓄積。受試者末劑靜脈滴注500mg左奧硝唑，左奧硝唑、M1、M2和M4的尿累積排出率Ae0-24h分別為19.7±4.6％、2.81±1.08％、0.357±0.190％和5.17±0.57％;受試者末劑靜脈滴注750mg左奧硝唑，左奧硝唑、M1、M2和M4的Ae0-24h分別為14.3±20.4％、2.22±3.76％、0.152±0.045％和3.49±5.28％。③500mg組和750mg組中女性受試者左奧硝唑的Cmax和A

20、UC0-τ均高于男性受試者，500mg組的蓄積比AR女性高于男性，而750mg組AR的性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明500mg，q12h連續(xù)給藥可以使女性受試者有較高的藥物蓄積;兩劑量組中左奧硝唑原藥的尿排出藥動(dòng)學(xué)參數(shù)間的性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④兩組受試者給予左奧硝唑后均未出現(xiàn)嚴(yán)重不良事件。500mg組共發(fā)生AE4例6例次，其中胃部不適1例1例次，實(shí)驗(yàn)室檢查異常的AE共3例5例次。本組無臨床ADR，實(shí)驗(yàn)室異常ADR3例5例次。750mg組共

21、發(fā)生AE5例7例次，臨床AE為3例4例次，實(shí)驗(yàn)室檢查異常的AE3例4例次，其中1例同時(shí)伴臨床和實(shí)驗(yàn)室AE。該10號(hào)受試者于靜脈滴注后第2日出現(xiàn)牙齦根尖膿腫，血常規(guī)檢查中性粒細(xì)胞升高，采取藥物治療，該受試者終止，判斷與試驗(yàn)藥物可能無關(guān)。本組無臨床ADR，實(shí)驗(yàn)室ADR共2例3次。兩組受試者給藥前后血壓和心率等生命體征、12-導(dǎo)聯(lián)心電圖檢查均無顯著差異。
　　綜上所述，左奧硝唑500mg和750mg單劑給藥后藥動(dòng)學(xué)特征相似;多劑給藥顯示

22、與500mg，q12h相比，750mg, qd可以明顯降低左奧硝唑在體內(nèi)的蓄積;左奧硝唑及其代謝產(chǎn)物M1、M2和M4的尿排出率較低，在體內(nèi)沒有達(dá)到物料平衡;500mg，q12h和750mg，qd給藥方案的安全性良好。
　　第三部分左奧硝唑氯化鈉注射液的藥動(dòng)學(xué)/藥效學(xué)研究及給藥方案評(píng)價(jià)
　　左奧硝唑?yàn)?-硝基咪唑類抗菌藥，與甲硝唑相仿，應(yīng)同屬濃度依賴型抗菌藥，其PK/PD參數(shù)為Cmax/MIC和AUC/MIC。左奧硝唑500

23、mg和750 mg給藥方案的PK數(shù)據(jù)來自第二部分，AUC0-24分別為393.4±104.1和298.2±45.6 mg·h/L，均為末劑給藥值，其中500mg組根據(jù)2×AUC0-12得到。左奧硝唑?qū)Υ嗳鯏M桿菌、其他擬桿菌、艱難梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、大消化鏈球菌的MIC90分別為0.5 mg/L、2 mg/L、0.25 mg/L、2mg/L和1 mg/L。上述AUC0-24結(jié)果結(jié)合左奧硝唑?qū)捬蹙腗IC90結(jié)果，應(yīng)用Monte Carl

24、o模擬，計(jì)算左奧硝唑這兩種給藥方案(500mg，q12h和750mg，q24h)在穩(wěn)態(tài)血藥濃度下對(duì)厭氧菌主要病原菌的累積反應(yīng)百分比及不同MIC水平下的藥效學(xué)達(dá)標(biāo)概率。
　　研究顯示:750mg，q24h給藥和500mg，q12h兩種給藥方案對(duì)脆弱擬桿菌及其他擬桿菌、艱難梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭桿菌、大消化鏈球菌等達(dá)到AUC0-24h/MIC=70靶值的CFR均大于99.9％。另外，對(duì)不同MIC水平下PTA計(jì)算結(jié)果顯示，當(dāng)病原菌的MIC≤2