高良姜等5味山姜屬中藥不同極性部位的化學(xué)成分與其溫胃散寒作用研究.pdf

1、目的:
　　1.紅豆蔻、草豆蔻、益智3味山姜屬中藥的最佳提取工藝條件，為3味山姜屬中藥的化學(xué)成分分析及其藥理作用研究奠定基礎(chǔ)。
　　2.研究高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智5味山姜屬中藥乙醇提取部位、石油醚部位、乙酸乙酯部位的高效液相色譜指紋圖譜，分析比較其特征峰所代表的化學(xué)成分相關(guān)性。
　　3.采用高效液相色譜法對(duì)高良姜和草豆蔻石油醚部位中的高良姜素、山姜素、喬松素、小豆蔻明和榿木酮進(jìn)行含量測(cè)定。
　　4

2、.通過(guò)觀察高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智5山姜屬中藥乙醇提取物對(duì)胃潰瘍寒證大鼠胃潰瘍指數(shù)、血清環(huán)磷酸腺苷（cAMP）和環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷(cGMP)含量及cAMP/cGMP比值的影響，比較其溫胃散寒藥效差異。
　　方法:
　　1.分別采用加熱回流提取法、超聲波提取法和冷浸提取法進(jìn)行提取，確定最佳提取方法，分別采用單因素考察方法確定提取溶劑、乙醇濃度、提取時(shí)間和提取次數(shù)的因素水平，運(yùn)用L9(34)正交試驗(yàn)方法優(yōu)選紅豆蔻、草豆蔻

3、、益智的提取工藝，采用藥材提取溶劑、溶劑倍量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為因素的正交設(shè)計(jì)，以干膏率作為篩選指標(biāo)，對(duì)其提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。
　　2.采用高效液相色譜法(HPLC)研究5味山姜屬中藥不同極性部位的指紋圖譜，色譜條件:采用phenomenex-C18(250×6mm，5μm)色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-水溶液，梯度洗脫，流速:1.0mL/min，柱溫:30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)220nm;采用國(guó)家藥典委員會(huì)相似度評(píng)價(jià)軟件分析比較其化學(xué)成分相關(guān)性。

4、
　　3.采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)高良姜、草豆蔻石油醚部位的高良姜素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮進(jìn)行含量測(cè)定。色譜條件:采用phenomenex-C18(250×4.6mm，5μm)色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-水溶液，梯度洗脫，流速:1.0mL/min，柱溫:30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)260nm。
　　4.取SPF級(jí)SD大鼠90只，隨機(jī)取其中10只作為空白組，剩下的大鼠采用寒涼藥冰知母水提液和冰食醋刺激復(fù)制胃潰瘍寒證動(dòng)物模型。

5、造模成功后將大鼠隨機(jī)分為模型組、西咪替丁組、附子理中丸組、高良姜組、大高良姜組、紅豆蔻組、草豆蔻組、益智組共8組。空白組、模型組灌服蒸餾水，其余各組分別灌服各受試藥物。采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定血清cAMP、cGMP含量，計(jì)算cAMP/cGMP比值，觀察5山姜屬中藥對(duì)胃實(shí)寒證大鼠血清cAMP、cGMP含量及cAMP/cGMP比值的影響。
　　結(jié)果:
　　1.最佳提取工藝為:乙醇加熱回流提取，采用60％乙醇，溶劑倍量為30倍，提取時(shí)間

6、為4h，提取次數(shù)2次。
　　2.5味山姜屬中藥乙醇提取部位化學(xué)成分相似度分別為0.935、0.944、0.723、0.882、0.047;石油醚部位化學(xué)成分相似度分別為0.741、0.855、0.61、0.51、0.68;乙酸乙酯部位化學(xué)成分相似度分別為0.955、0.805、0.371、0.794、0.345。結(jié)果表明，5味山姜屬中藥不同極性部位的指紋圖譜特征峰所代表的化學(xué)成分有一定的相似性。
　　3.高良姜素濃度線性范圍

7、為y=31577x-58.17，r=0.9999;山姜素y=153051x+54.07，r=0.9991;榿木酮y=74113x+9.53，r=1;喬松素y=29043x+25.89，r=0.9994;小豆蔻明y=69672x+0.87，r=0.9995，結(jié)果表明高良姜素、山姜素、榿木酮、喬松素、小豆蔻明在線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;樣品平均回收率分別為山姜素97.91％，RSD為1.35％;喬松素97.83％，RSD為1.35％;高良姜素

8、98.62％，RSD為1.93％;小豆蔻明101.17％，RSD為0.86％;榿木酮99.43％，RSD為0.34％，結(jié)果表明方法的準(zhǔn)確性良好。
　　4，模型組大鼠胃潰瘍指數(shù)與空白組比較顯著升高(P＜0.01)，給予治療藥后，各治療藥組大鼠胃潰瘍指數(shù)與模型組相比顯著降低(P＜0.01或P＜0.05），高良姜組、紅豆蔻和益智組與模型組相比顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。模型組大鼠血清的cAMP含量比空白組顯著降低(P＜0

9、.01);模型組cAMP值、cAMP/cGMP比值與空白組比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），cGMP值改變不明顯;給予治療藥后，各治療藥組大鼠血清的cAMP含量與模型組相比顯著升高(P＜0.01或P＜0.05)，cAMP/cGMP比值升高，cGMP值改變不明顯。
　　結(jié)論:
　　1.本提取方法簡(jiǎn)單、提取率高，為3味山姜屬中藥的化學(xué)成分分析及其藥理作用奠定基礎(chǔ)。
　　2.中藥HPLC指紋圖譜能夠全面反映中藥化

10、學(xué)成分整體群集特征，本試驗(yàn)對(duì)5味山姜屬中藥不同極性提取物的指紋圖譜進(jìn)行探索性研究，各色譜峰在客觀上有一定的相似性，為探討山姜屬中藥親緣關(guān)系與化學(xué)成分相關(guān)性提供思路。
　　3.高良姜和草豆蔻石油醚部位的高良姜素、喬松素、榿木酮化學(xué)成分分布不同，含量有較大的差異。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于該屬中藥主要化學(xué)成分的含量測(cè)定。
　　4.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草豆蔻和益智5味山姜屬中藥對(duì)胃黏膜有一定的保護(hù)作用。