HOXD10基因在人類乳腺癌中的表達研究.pdf

1、目的：探討同源異型盒基因HOXD10基因在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展進程中的作用，及其表達異常與臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性。 方法： 1、收集44例新鮮乳腺癌組織及16例乳腺良性病變組織標本，將其分為乳腺癌組及乳腺良性病變組，組織離體后20分鐘內(nèi)置于液氮中，后轉(zhuǎn)入一80℃冰箱保存。 2、采用Trizol法抽提組織總RNA，提取得到的RNA采用M-MIV逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈。 3、從GeneBank檢索

2、human 18s rRNA和HOXD10基因的全長序列，采用oligo 6.0引物設(shè)計軟件分別設(shè)計18s rRNA和HOXD10基因的引物。 4、以cDNA為模板，經(jīng)PCR反應(yīng)分別擴增18s rRNA和HOXD10基因片斷，制備相對定量標準品。5、以逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，進行實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Realtime RT-PCR)，檢測44例乳腺癌組織及16例乳腺良性病變組織HOXD10 mRNA表達，并分析HO

3、XD10mRNA表達與乳腺癌臨床病理資料間的相關(guān)性。 結(jié)果： 1、用制備的相對定量標準品繪制的實時熒光定量：RT-PCR試驗的標準曲線，HOXD10基因標準曲線斜率(slope)為-4.120，相關(guān)系數(shù)(correlationcoefficient)為1.00。18s rRNA基因熒光定量RT-PCR試驗的標準曲線斜率(slope)為-3.863，相關(guān)系數(shù)(correlation coefficient)為1.00。均符

4、合要求。 2、HOXD10mRNA在乳腺癌中表達范圍為3.26～75.00，均值為25.25，在乳腺良性病變中表達范圍為11.98～162.50，均值為78.32。乳腺癌中HOXD10 mRNA的表達明顯低于乳腺良性病變，兩組間有顯著差異(P<0.01)。 3、組織學分級為Ⅲ級的標本中HOXD10 mRNA的表達明顯低于其它2個組別。 4、HOXD10 mRNA的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、TNM分期之間未見相關(guān)

5、性(P>0.05)。 結(jié)論： 1、乳腺癌組織HOXD10 mRNA表達明顯降低，且組織學分級為Ⅲ級的標本中HOXD10 mRNA的表達明顯低于其它2個組別，考慮該基因可能為乳腺癌發(fā)生發(fā)展的抑制因子，提示我們對該基因應(yīng)該給予更多關(guān)注。 2、本次實驗未發(fā)現(xiàn)HOXD10 mRNA表達減少與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、TNM分期之間有明顯相關(guān)性，此結(jié)論仍需進一步行大樣本實驗證實。 3、本實驗所用SYBR GREENⅠ實