尼加拉瓜大芻草(Zea nicaraguensis)耐漬候選基因ZnCYP86的克隆及功能分析.pdf

1、漬澇脅迫是影響我國(guó)玉米生產(chǎn)的一個(gè)重要因素。栽培玉米經(jīng)長(zhǎng)期的人工選擇與馴化，遺傳基礎(chǔ)十分狹窄，基本上喪失了耐漬特性。玉米的野生近緣種-大芻草生長(zhǎng)在環(huán)境惡劣的自然條件下，具有很多栽培玉米不具備的優(yōu)良特征特性，尤其表現(xiàn)在抗逆性、抗病蟲(chóng)害等方面。野生近緣種的研究與利用，是拓寬玉米種質(zhì)基礎(chǔ)的重要途徑之一。本研究以玉米野生近緣種尼加拉瓜大芻草（Zea nicaraguensis）為研究對(duì)象，利用同源克隆的方法克隆耐漬相關(guān)基因細(xì)胞色素P450基因(C

2、ytochrome P450)ZnCYP86，并借助農(nóng)桿菌介導(dǎo)法成功將ZnCYP86基因轉(zhuǎn)入到模式植物煙草W38中進(jìn)行研究。研究結(jié)果如下:
　　1.ZnCYP86基因的克隆與分析:本實(shí)驗(yàn)從尼加拉瓜大芻草TZ04中克隆到耐漬關(guān)鍵基因CYP86，其參與了木栓質(zhì)的生物合成。該基因全長(zhǎng)1782bp，已提交GenBank，(ID:KF815742)，其中CDS編碼區(qū)1647bp，編碼548個(gè)氨基酸。對(duì)其一級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，結(jié)果表明此基因編碼蛋

3、白質(zhì)為親水蛋白，且蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。
　　2.ZnCYP86在玉蜀黍?qū)賂Z04中的定量表達(dá):對(duì)TZ04在淹水時(shí)ZnCYP86的表達(dá)量做了分析，結(jié)果表明總體上ZnCYP86隨著淹水時(shí)間的增加表達(dá)量逐漸上升，TZ04中的ZnCYP86的表達(dá)量隨著淹水時(shí)間的延長(zhǎng)迅速的變化。
　　3.ZnCYP86在模式植物煙草中的表達(dá):對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草T2的代耐漬性進(jìn)行分析，并對(duì)不同淹水時(shí)間段轉(zhuǎn)基因植株的SOD、POD、MDA、CAT四種酶活性進(jìn)行測(cè)