紫莖澤蘭主要毒素euptox A的提取及其生物活性初步研究.pdf

1、紫莖澤蘭（Eupatorium aderwphorum Spreng或Ageratina adenophora Spreng）大約于40年代從中緬邊境傳入云南省，現(xiàn)已在云南、四川、貴州、廣西和西藏有廣泛的分布，已成為危害我國最為嚴重的外來入侵物種之一。對本地植物帶來災難性的危害，給畜牧業(yè)帶來不可估量的損失，同時破壞了生態(tài)平衡，目前尚無有效的防除方法。本試驗旨在從紫莖澤蘭中提取主要毒素9-羰基-10，11-去氫澤蘭酮(euptox A)，

2、構(gòu)建一種高效快速的提取方法;研究euptox A的殺螨活性、抗腫瘤活性，以期能篩選出紫莖澤蘭主要毒素的有益生物活性，為探索紫莖澤蘭新生源奠定理論基礎(chǔ)，同時也為尋找防治、利用紫莖澤蘭的新方法提供依據(jù)。其研究內(nèi)容如下:
　　1.紫莖澤蘭主要毒素euptox A的提取、分離及純化流程:甲醇超聲提取，乙酸乙酯萃取，硅膠柱層析，薄層色譜法(TLC)初步篩選，上D101大孔樹脂柱洗脫，粗品反復硅膠柱層析。高效液相色譜檢測，結(jié)果表明euptox

3、 A提取樣品其純度可達到98％以上。
　　2.采用互補雙對數(shù)(CLL)模型分析euptox A對兔癢螨和兔疥螨的體外毒性。結(jié)果顯示:euptoxA對兔癢螨和兔疥螨都有很強的殺滅效果。EuptoxA在濃度3 mg/mL和4 mg/mL時在4h內(nèi)能夠殺死所有的疥螨，而在4 mg/mL時也可在4h內(nèi)殺死所有的兔癢螨。在euptox A濃度為2 mg/mL、3 mg/mL和4 mg/mL時對兔疥螨的半數(shù)致死時間(LT50)分別為0.687

4、 h、0.526 h、0.326 h。EuptoxA濃度為3 mg/mL和4mg/mL時對兔癢螨的LT50分別為0.693 h和0.493 h。EuptoxA在2h內(nèi)兔疥螨和兔癢螨的半數(shù)致死濃度(LC50)分別為1.068mg/mL、0.902mg/mL。結(jié)果表明，euptox A具有較強的殺螨活性，有潛力作為動物殺螨的新藥物。
　　3.采用MTT比色法測定euptox A體外抗腫瘤活性，以人肺腺癌細胞系A(chǔ)549、人宮頸癌細胞系H

5、eLa和人喉表皮癌細胞系Hep-2為靶細胞，并采用膜聯(lián)蛋白Ⅴ-FITC/PI雙染色法用流式細胞儀和熒光定量PCR測定HeLa細胞凋亡周期及相關(guān)凋亡基因的表達。結(jié)果顯示:euptox A對體外培養(yǎng)的三株腫瘤細胞都有不同程度的抑制作用。不同euptox A濃度(0.25 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL和2 mg/mL）對三株腫瘤細胞的抑制作用差異顯著（P＜0.05或P＜0.01）。隨著濃度的增加抑制率增加，對A549、HeL

6、a和Hep-2三株腫瘤細胞系的半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為369μg/mL、401μg/mL和427μg/mL。流式細胞儀檢測結(jié)果顯示: euptox A處理組處于S期的細胞數(shù)量與陰性對照組比較差異性顯著(P＜0.05或P＜0.01)，并呈一定的量效關(guān)系，說明euptox A阻滯細胞于S期，使HeLa細胞發(fā)生S阻滯的生物學效應，從而起到抗腫瘤作用。熒光定量PCR結(jié)果顯示:euptoxA能促進HeLa細胞中caspase-10 mRNA