中華抱莖蓼次生代謝產(chǎn)物及其生物活性研究.pdf

1、中藥中華抱莖蓼 (俗稱血三七)為蓼科蓼屬中華抱莖蓼 (Polygonum amplexicaule D．Don var.sinense Forbes et Hemsl.)的干燥根莖，是湖北省恩施地區(qū)少數(shù)民族民間常用藥材，具有清熱解毒，活血化瘀的作用，用于治療許多疾病，如促進(jìn)血液循環(huán)，治療各種骨折等，在當(dāng)?shù)乇环Q為跌打損傷的“要藥”?，F(xiàn)臨床證實其還能抗真菌、治療腦動脈粥樣硬化及婦女痛經(jīng)等疾病。除藥效確切外，血三七資源分布也很廣泛：既有大量野

2、生的，也有大量家種的。但到目前為止，人們對其研究仍然比較零星，尚缺乏系統(tǒng)性，阻礙了血三七的廣泛應(yīng)用。為此，本研究對血三七次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行了提取分離、結(jié)構(gòu)鑒定和生物活性篩選，并對不同產(chǎn)地的血三七進(jìn)行定性和定量指紋圖譜分析研究，為制定該藥材完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。在此基礎(chǔ)上，利用現(xiàn)代藥理學(xué)手段對血三七抗真菌活性、促骨折愈合作用機(jī)理及鎮(zhèn)痛等不同藥效進(jìn)行了驗證研究，為將來開發(fā)新藥提供科學(xué)依據(jù)。本研究的主要工作及創(chuàng)新點(diǎn)如下：
　　

3、（1）采用各種色譜技術(shù)，包括薄層色譜、正相硅膠柱、反向硅膠柱、葡聚糖凝膠柱、半制備高效液相柱，對血三七乙酸乙酯部位的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)分離研究，獲得40余個單體化合物；運(yùn)用現(xiàn)代波譜技術(shù) （如 UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、EI-MS）分析其結(jié)構(gòu)，最終鑒定了23個化合物，其中20個化合物系首次從該植物中分離得到，更有5個是首次從蓼屬中分離獲得，且多數(shù)為黃酮類和蒽醌類化合物，具有較強(qiáng)藥理活性。
　　 （2）鑒于

4、目前尚無血三七質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，在化學(xué)研究的基礎(chǔ)上，首次采用高效液相色譜法（HPLC法）對9個不同產(chǎn)地的血三七進(jìn)行了指紋圖譜研究，結(jié)果證實不同來源血三七的特征指紋圖譜具有較高相似性，其相似度均在90％以上，尚存一些細(xì)小差異。這種結(jié)果符合中藥指紋圖譜質(zhì)量要求。因此，該方法的建立不僅為鑒別不同產(chǎn)地血三七提供了依據(jù)，而且為該藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供了科學(xué)依據(jù)。
　　 （3）采用體外實驗對血三七抗菌活性進(jìn)行了初步篩選研究。利用藥敏紙片法檢測了血三七

5、粗提物的乙酸乙酯、正丁醇部位的抗真菌活性；用瓊脂稀釋法測定血三七抗真菌活性的最小抑菌濃度；利用平板法，考察了光照、溫度、pH值對其抗菌活性的影響。結(jié)果表明血三七具有良好的抗真菌效果，且藥效穩(wěn)定，受外界因素干擾小，特別是極性較大的正丁醇部位，只需0.013 mg/mL 就可顯示出較強(qiáng)抑菌效果。
　　 （4）采用體外細(xì)胞模型，對血三七總提物、石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水部位提取物及從乙酸乙酯部位分離得到的化合物Emodi

6、n-8-O-β-D-glucoside (EG)進(jìn)行了促骨折愈合機(jī)理研究。以MC3T3-E1細(xì)胞系及從小鼠頭蓋骨分離得到的成骨細(xì)胞為模型，以CCK-8法檢測成骨細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞增殖周期，ELISA法檢測堿性磷酸酶(ALP)活性、前列腺素E2 (PGE2)的含量。結(jié)果顯示，低劑量的總提物 (0.1-100 μg/mL)及各提取部位 (0.1-100 μg/mL)和化合物 (0.1-100 ng/mL)均能促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖和DN

7、A合成：總提物和各部位作用下的S期比例從9.78％增加到27.29％，而化合物則是從16.34％增加到32.16％。這說明血三七促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖是通過促進(jìn)細(xì)胞S期比例來實現(xiàn)的。同時，各提取物及化合物EG對成骨細(xì)胞分化均有一定作用，且呈劑量依賴關(guān)系。需特別指出的是，化合物EG不僅具有良好的細(xì)胞增殖效果，而且能顯著促進(jìn)成骨細(xì)胞分化，這種作用主要體現(xiàn)在增加成骨細(xì)胞ALP的活性和降低PGE2的含量上。上述結(jié)果表明血三七促進(jìn)骨折愈合的機(jī)理是：血三

8、七直接刺激成骨細(xì)胞的增殖和分化，化合物EG是實現(xiàn)這種活性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　 （5）采用體內(nèi)實驗對血三七的鎮(zhèn)痛活性進(jìn)行了驗證。通過小鼠熱板法和醋酸所致小鼠扭體法，對血三七總提物、石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位及水部位的高、中、低三個劑量組進(jìn)行了實驗。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三種濃度的上述血三七各提取物均可使熱板所致小鼠舔足的痛閾值顯著提高 (p<0.05)，使醋酸所致小鼠扭體次數(shù)顯著減少 (p<0.01)，且水部位和正丁醇部位鎮(zhèn)痛效果