LXRs在LPS誘導(dǎo)THP-1巨噬細(xì)胞微粒產(chǎn)生中的作用及機(jī)制.pdf

1、研究背景：ALI/ARDS是臨床上常見的危重癥，過度的炎癥反應(yīng)是ALI/ARDS的特征性表現(xiàn)之一，微粒是炎癥反應(yīng)的重要生物學(xué)標(biāo)志物，在ALI/ARDS的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。巨噬細(xì)胞在ALI/ARDS時(shí)迅速增加，并且對(duì)其產(chǎn)生重要影響。肝X受體能夠減輕ALI/ARDS及其炎癥反應(yīng)，但是其具體機(jī)制尚不清楚，進(jìn)一步研究其機(jī)制對(duì)于ALI/ARDS的防治具有重要意義。
　　目的：通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，觀察肝X受體在LPS誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)

2、胞微粒產(chǎn)生過程中的作用以及微粒濃度與THP-1巨噬細(xì)胞炎性反應(yīng)的關(guān)系。
　　方法：1、先用PMA100 nM刺激THP-1巨噬細(xì)胞貼壁,更換新鮮培養(yǎng)基再用LXRs激動(dòng)劑T0901317（0μM、5μM、10μM、20μM）預(yù)處理THP-1巨噬細(xì)胞，6h后更換新鮮培養(yǎng)基,然后用0.1μg/ml的LPS培養(yǎng)細(xì)胞24h，采用western blot免疫印跡檢測(cè)TLR4蛋白的表達(dá)、ELISA檢測(cè) TNF-α、IL-6、IL-1β的表達(dá)和微

3、粒濃度(以磷脂酰絲氨酸濃度表示)。2、先用PMA100 nM刺激THP-1巨噬細(xì)胞貼壁,更換新鮮培養(yǎng)基再用LXRs激動(dòng)劑T0901317（10μM）預(yù)處理THP-1巨噬細(xì)胞（0h、6h、12h、24h），再次更換新鮮培養(yǎng)基后用0.1μg/ml的LPS培養(yǎng)細(xì)胞24h，采用western blot免疫印跡檢測(cè)TLR4蛋白的表達(dá)、ELISA檢測(cè) TNF-α、IL-6、IL-1β的表達(dá)和微粒濃度(以磷脂酰絲氨酸濃度表示)。3、先用PMA100

4、nM刺激THP-1巨噬細(xì)胞貼壁,更換新鮮培養(yǎng)基后將THP-1巨噬細(xì)胞分別進(jìn)行空白對(duì)照處理、LXRs激動(dòng)劑（10μM）處理、TLR4抑制劑TAK-242（3μM）處理，6h后再次更換新鮮培養(yǎng)基，用0.1μg/ml的LPS培養(yǎng)細(xì)胞24h，采用western blot免疫印跡檢測(cè)TLR4蛋白的表達(dá)、ELISA檢測(cè)TNF-α、IL-6、IL-1β和微粒濃度(以磷脂酰絲氨酸濃度表示)。
　　結(jié)果：1、LXRs激動(dòng)劑T0901317能顯著抑制

5、THP-1巨噬細(xì)胞TLR4蛋白、TNF-α、IL-6、IL-1β的表達(dá)以及微粒的產(chǎn)生，并具有濃度依賴關(guān)系。與0μM組相比，LXRs激動(dòng)劑T0901317在5μM時(shí)即有顯著作用，且隨著LXRs激動(dòng)劑濃度增加抑制作用也增強(qiáng)，20μM組LXRs激動(dòng)劑對(duì)TLR4蛋白、TNF-α、IL-6、IL-1β的表達(dá)以及微粒的產(chǎn)生抑制作用最為顯著（P<0.001）。2、LXRs激動(dòng)劑T0901317能顯著抑制THP-1巨噬細(xì)胞TLR4蛋白、TNF-α、IL

6、-6、IL-1β的表達(dá)以及微粒的產(chǎn)生，并且在24h內(nèi)具有時(shí)間依賴關(guān)系。與0h組相比，LXRs激動(dòng)劑T090131710μM處理6h時(shí)即有顯著作用，且隨著LXRs激動(dòng)劑作用時(shí)間延長(zhǎng)抑制作用也增強(qiáng)，24h組LXRs激動(dòng)劑對(duì)TLR4蛋白、TNF-α、IL-6、IL-1β的表達(dá)以及微粒的產(chǎn)生抑制最為顯著（P<0.001）。3、THP-1巨噬細(xì)胞微粒濃度與TLR4蛋白表達(dá)水平以及TNF-α、IL-6、IL-1β濃度呈正相關(guān)。4、TLR4抑制劑TA